张传林，胡庆红
（遵义医学院药学院，贵州 遵义 ５６３００３）
摘要：在ｐＨ７．０的Ｂｒｉｔｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ缓冲液和适量丙酮存在条件下，以吐温－８０为稳定剂，高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、甲氰菊酯、联苯菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯可使体系共振光散射强度显著增强。在最大散射波长３６３ ｎｍ处有良好线性关系，其检出限为０．０６９～０．１１３ μｇ／ｍＬ。蔬菜样品经乙腈超声提取，弗罗里硅土固相萃取柱净化后，在０．５和１．０ ｍｇ／ｋｇ添加水平下，各农药的回收率在８６．７％～９８．０％，相对标准偏差小于６．３５％，结果令人满意，据此建立了检测拟除虫菊酯类农药残留量快速、灵敏的新方法。
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关键词 ：共振光散射；拟除虫菊酯；固相萃取；检测
中图分类号：Ｏ６５７．３９文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）05－1195-03
ＤＯＩ： １０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０5．０42
收稿日期：２０１４－１２－０５
基金项目：贵州省科学技术基金项目［黔科合Ｊ字ＬＫＺ（２０１１）４４］
作者简介：张传林（１９９０－），男，江苏盐城人，在读硕士研究生，研究方向为药物分析，（电话）１５５１９２１６１８９（电子信箱）ｚｈａｎｇｃｌ１２１５＠１６３．ｃｏｍ；
通信作者，胡庆红，教授，主要从事分子光谱的分析应用，（电话）１３５９５２１５３２８（电子信箱）ｈｕｑｉｎｇｈｏｎｇ１９６３＠１２６．ｃｏｍ。
拟除虫菊酯类农药（Ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ pｅｓｔｉｃｉｄｅｓ）是一类仿生合成的广谱性杀虫剂，具有高效、低毒、低残留、可被生物降解等优点［１］，广泛应用于农作物虫害的防治。目前，关于拟除虫菊酯类农药残留量的检测方法主要有气相色谱法［２，３］、高效液相色谱法［４］、气相色谱－质谱联用法［５］、液相色谱－质谱联用法［６］等，但其检测时间长、成本高，且需大型贵重的分析仪器，难以在一些基层实验室普及。因此，建立快速、实用的检测蔬菜中农药残留量的分析方法显得尤为重要。
共振光散射法是近些年来发展起来的一种简便、快捷、灵敏的光谱分析新技术，在蛋白质［７］、核酸［８］、免疫［９］、药物［１０，１１］、无机离子［１２］、表面活性剂［１３］、纳米微粒［１４］等分析领域得到广泛应用，但鲜见其应用于农药检测的报道。
１ 材料与方法
１．１ 仪器与试剂
Ｃａｒｙ Ｅｃｌｉｐｓｅ型荧光分光光度计（美国瓦里安公司）、８６８型酸度计 （美国奥立龙公司）。
弗罗里硅土（化学纯，国药集团化学试剂有限公司），中性氧化铝（化学纯，上海纳辉干燥试剂厂）。农药标准品：高效氯氟氰菊酯（λ－ｃｙｈａｌｏｔｈｒｉｎ）、氯菊酯（ｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ）、甲氰菊酯（ｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎ）、联苯菊酯（ｂｉｆｅｎｔｈｒｉｎ）、氰戊菊酯（ｆｅｎｖａｌｅｒａｔｅ）及氯氰菊酯（ｃｙｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ）均购于上海市农药研究所。配制一系列不同ｐＨ的Ｂｒｉｔｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（Ｂ－Ｒ）缓冲溶液。其他试剂均为分析纯，试验用水为去离子水。无水硫酸镁、弗罗里硅土、中性氧化铝在６５０ ℃马弗炉烘烤５ ｈ，加５％水脱活后贮存于密封干燥器中备用。
１．２ 试验方法
１．２．１ 标准品溶液的配制 分别称取６种农药标准品０．０１０ ０ ｇ，用丙酮定容于５０ ｍＬ的容量瓶中，配成２００ μｇ／ｍＬ的储备液；临用时用去离子水稀释成１０ μｇ／ｍＬ的标准品溶液；分别量取等体积的６种农药标准品溶液，配成１０ μｇ／ｍＬ的混合标准品溶液。
１．２．２ 固相萃取（ＳＰＥ）小柱的填装 取萃取柱空管，底部装１片筛板，从下至上依次填入无水硫酸镁１．０ ｇ、弗罗里硅土２．０ ｇ、无水硫酸镁１．０ ｇ，每种填料填入后轻轻敲实，使填料均匀紧密地分布在柱中，柱上端再加１片筛板，贮存于密封干燥器中备用。
１．２．３ 样品处理 将样品洗净、晾干、匀浆，称取２０．０ ｇ于烧杯中，加入５．０ ｇ 氯化钠、２０ ｍＬ乙腈，超声提取２０ ｍｉｎ。减压抽滤，收集滤液于５０ ｍＬ的聚四氟乙烯离心管中，再以４ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心5 ｍｉｎ，吸取上层乙腈溶液，过无水硫酸镁柱，６０ ℃水浴浓缩至干，残渣加２ ｍＬ二氯甲烷溶解。用５ ｍＬ二氯甲烷淋洗活化弗罗里硅土柱，液面到达筛板表面后，加入样品提取液，用１５ ｍＬ二氯甲烷分两次洗脱，收集此洗脱液，６０ ℃水浴浓缩至干，残渣用０．５ ｍＬ丙酮溶解，待测。
１．２．４ 测定方法 在１０ ｍＬ具塞比色管中依次加入１ ｍＬ ｐＨ７．０的缓冲液，１ ｍＬ浓度为５０ μｇ／ｍＬ的吐温－８０溶液，２ ｍＬ浓度为１０ μｇ／ｍＬ的农药标准品溶液，用丙酮－水（１∶１９，Ｖ／Ｖ）定容到刻度，摇匀，室温静置２０ ｍｉｎ，在荧光分光光度计狭缝为５ ｎｍ，低压条件下，在２５０～７００ ｎｍ内使激发波长与发射波长相等同步扫描， 得到散射光谱。在３６３ ｎｍ波长处测得散射强度值为Ｉ，不加入农药测得空白值为Ｉ０，则ΔＩ＝Ｉ－Ｉ０。
２ 结果与分析
２．１ 共振散射光谱
图１为７种农药标准液（含混合菊酯溶液）与吐温－８０混合后的散射光谱图，该图表明体系中只有Ｂ－Ｒ缓冲液和吐温－８０时共振散射强度很弱，而加入拟除虫菊酯类农药后共振散射强度显著增大。由于这类农药为疏水性的有机分子，在丙酮－水溶液中会因范德华力、氢键和疏水作用力的共同影响而产生聚集作用，形成粒径较大的聚集体，从而导致体系共振散射显著增强，并在３６３和４７８ ｎｍ处出现特征散射峰，最大散射波长３６３ ｎｍ处的散射强度与各农药在一定浓度范围内呈良好的线性关系。
２．２ 试验条件的优化
２．２．１ 测定条件的选择 体系中不加入吐温－８０时， 体系稳定性差， 加入适量吐温－８０溶液后，其散射强度在１０～１８０ ｍｉｎ内稳定，本试验选择反应时间为２０ ｍｉｎ； 缓冲溶液的ｐＨ为２．０～１２．０时，散射值较大，选择ｐＨ７．０的； 缓冲液温度在１０～２５ ℃时散射值较大，高于３０℃时散射值降低， 选择的最适温度为２０～２５ ℃；吐温－８０的浓度为１０～６０ μｇ／ｍＬ时的体系散射值较大且稳定，选择吐温－８０的浓度为５０ μｇ／ｍＬ。
２．２．２ 提取剂和洗脱剂的选择 对比了乙腈、丙酮这两种常用提取剂以及丙酮、二氯甲烷作为洗脱剂的效果。最终选择乙腈作为提取剂，二氯甲烷作为洗脱剂。
２．２．３ 固相萃取柱的选择 分别用弗罗里硅土、中性氧化铝作固相萃取柱填料，测定其对供试农药回收率。结果弗罗里硅土净化柱的回收率为９６．５８％、中性氧化铝净化柱的回收率为８７．５５％，表明弗罗里硅土固相萃取柱效果优于中性氧化铝柱。
２．３ 共存物质的影响
在１０ ｍＬ比色管中混合菊酯的含量为２０ μｇ，体系测定误差小于±１０％时，共存物质的允许量为：淀粉、蔗糖、葡萄糖、Ｄ－葡萄糖酸钙、十二烷基磺酸钠、水杨酸钠、尿素、（ＮＨ４）２ＳＯ４、（ＮＨ４）２Ｓ２Ｏ８、 Ｎａ２ＨＰＯ４、 ＫＨ２ＰＯ４、 Ｎａ２Ｓ、 ＫＩ、 ＣａＣｌ２、 ＢａＣｌ２、ＣＭC－Ｎａ、ＣｕＳＯ４、 ＺｎＣｌ２、 ＫＢｒ、 ＫＣｌＯ、 Ｎａ２Ｂ４Ｏ７、 Ｈ２Ｃ２Ｏ４、ＮａＨＣＯ３、ＣｄＣｌ２、 ＺｎＳＯ４、 ＫＳＣＮ、 ＭｎＡｃ２、 Ｐｂ（ＮＯ３）２、Ｌｉ２ＳＯ４、ＮａＨＳＯ３、ＮａＣｌＯ３、Ｎａ３ＰＯ４、ＫＩＯ４、ＣｕＣｌ２、ＡｌＣｌ３、ＮａＣｌ、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＡｃ、ＭｇＳＯ４、Ｎａ２Ｓ２Ｏ７、ＫＮＯ３、Ｋ２Ｃ２Ｏ４的允许量均大于５ ０００ μｇ，ＮａＮＯ２为２ ５００ μｇ，ＦｅＳＯ４、ＦｅＣｌ３为１ ２５０ μｇ、Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７为６０ μｇ。干扰较大的物质有Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７，但是一般在实际样品体系中含量极低，故无需考虑其干扰。同时还试验了乙醇、丙酮对散射强度的影响，结果当乙醇和丙酮的体积分数小于８％时，对散射强度无明显影响。
２．４ 标准曲线及方法灵敏度
根据方法“１．２．４”，测定体系中不同浓度拟除虫菊酯类农药的散射值，并根据ΔＩ和浓度（C）绘制标准曲线，结果如表１所示。
２．５ 样品的测定结果
取白菜样品２０．０ ｇ，分别添加０．５ ｍｇ／ｋｇ和１．０ ｍｇ／ｋｇ的拟除虫菊酯类农药，按照方法“１．２．３”和“１．２．４”处理，计算各农药的回收率，并与高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法［１５］对比，结果见表２，各农药的回收率为８６．７％～９８．０％，ＲＳＤ均小于６．３５％，符合痕量分析的要求，并与ＨＰＬＣ法测定结果基本一致。
３ 小结与讨论
由于样品基质的复杂性，当前许多样品前处理方法效果较差，本试验通过对比乙腈、丙酮两种常用提取溶剂，结果乙腈对样品中的脂质、色素、糖类溶解少，且一些水溶性杂质在后续离心操作中进入水相得以分离。同时对比丙酮和二氯甲烷的洗脱效果，发现丙酮作为洗脱剂时洗脱液中含少量色素，而使用二氯甲烷洗脱效果理想且能够大幅减少浓缩时间。
根据散射光谱图（图１）可知，该体系在３６３、４７８ ｎｍ处出现特征散射峰，并且散射峰值近似相等，因此在实际样品测定时，该体系３６３ ｎｍ处的散射测定值也应该与４７８ ｎｍ处的散射测定值近似相等，否则可能是另外的杂质干扰引起。
传统色谱检测技术仪器操作复杂、技术要求高，对样品进行前处理的同时还需通过有机膜过滤处理，并且分析过程中需大量有机溶剂，而共振散射法检测快速、操作简易，结果也比较满意。据此建立了一种测定蔬菜中拟除虫菊酯类农药残留量的快速、灵敏、简便的新方法。本法适用于蔬菜中多种拟除虫菊酯类农药残留量的快速检测，对于阳性试样，必要时可用色谱法进行复检。
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