李秀富１，２，高登慧２，姚红艳２，欧德渊２
（１．铜仁职业技术学院，贵州 铜仁 ５５４３００；２．贵州大学动物科学学院，贵阳 ５５００２５）
摘要：为探讨速效救心丸（QAHR）通过肥大细胞及其主要介质促进宫内胎儿生长发育的作用，将１４０只雌性小鼠随机分正常对照组、速效救心丸２５０ ｍｇ／ｋｇ、５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ给药组。当小鼠妊娠至１６ ｄ时脱颈椎处死小鼠，对其子宫组织分别进行组胺（ＨＡ）含量和一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活力测定，子宫肥大细胞（ＭＣ）、肝素阳性细胞显色及微血管密度（ＭＶＤ）测定。结果表明，５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ的速效救心丸给药组小鼠子宫ＭＣ数、肝素阳性细胞数、子宫ＭＶＤ和ＮＯＳ活力较对照组显著（Ｐ＜０．０５）升高，而子宫ＨＡ含量显著（Ｐ＜０．０５）低于对照组。提示速效救心丸可能通过增加小鼠子宫组织内ＭＣ数量及其主要介质的释放，改善血液循环和促进微血管生成，从而促进宫内胎儿的生长发育。
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关键词 ：速效救心丸（ＱＡＨR）；肥大细胞（ＭＣ）；介质；小鼠
中图分类号：Ｒ２８５ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）04－0920-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.04.037
收稿日期：２０１４－０６－１６
基金项目：贵州省自然科学基金项目（黔科合Ｊ字［２０１２］２１４６号）
作者简介：李秀富（１９８０－），男，贵州思南人，讲师，硕士，主要从事畜牧兽医教学和组织胚胎学研究，（电话）１５２８６７７３５３６（电子信箱）ｌｘｆ０００００＠１２６．ｃｏｍ；通信作者，欧德渊，（电子信箱）ｏｙｌ１０００＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
胎儿在子宫内的生长和发育是一个复杂的生物学过程。宫内发育迟缓（Ｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ， ＩＵＧＲ）是哺乳动物胚胎、胎儿或其器官在妊娠期间生长和发育受阻的现象，主要受遗传、环境以及母体和胎儿间营养物质供给的影响［１］，最终均导致子宫胎盘发育障碍及循环功能障碍，而妊娠期子宫胎盘的血液循环主要靠血管周围的活性介质和增加微血管生成来维持其低张状态［２］。ＩＵＧＲ对产后胎儿的生长发育及其饲料利用效率方面均有永久性的阻碍作用，对机体组成、肉质及其运动能力也存在长期的负面影响，给畜牧生产造成较大的经济损失，也是医学领域尚未能完全解决的一大难题［３］。速效救心丸（Ｑｕｉｃｋ－aｃｔｉｎｇ ｈｅａｒｔ ｒｅｌｉｅｖｅｒ，ＱＡＨＲ）由川芎和冰片组成。具有行气活血、祛瘀止痛、增加冠脉血流量、缓解心绞痛、舒张血管平滑肌等作用。本试验通过ＱＡＨＲ对孕鼠子宫肥大细胞（Ｍａｓｔ ｃｅｌｌ，ＭＣ）及其主要介质影响的研究，揭示ＱＡＨＲ通过ＭＣ及其主要介质对宫内胎儿生长发育的作用，旨在为综合防治ＩＵＧＲ提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 试验动物 从贵阳医学院实验动物中心购进昆明系［ｓｃｘｋ（黔）２００２－０００１］同批、同饲养条件小白鼠２１０只，体重（３５．０±３．０） ｇ，雌雄比２∶１。
１．１．２ 主要仪器 ＴＰ１０２０型自动组织脱水处理机、ＲＭ２１２５型旋转式切片机，德国ＬＥＩＣＡ；Ｍｉａｓ图像采集系统，四川大学计算机系图像图形研究所；９３０Ａ型荧光分光光度计，上海三科仪器有限公司。
１．１．３ 主要试剂 速效救心丸，天津中新药业集团公司第六中药厂，批号：６１７０４６；Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ Ｂｌｕｅ ０，Ｓｉｎｏ－Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｉｏｔｅｃ，批号：ｂｓ１０９１；一氧化氮合酶（Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：２００９０７０３；ＣＤ３４抗体，武汉博士德生物工程有限公司，批号：２００９０８０９；常规试剂等。
１．２ 方法
将１４０只体重（３５．０±３．０） ｇ雌性小白鼠随机分为４组，每组３５只（每笼２只），对照组饲喂基础日粮，ＱＡＨＲ给药组分为３个剂量组（即在基础日粮中分别按２５０、５００、７５０ mg／kg的量拌饲ＱＡＨＲ），小鼠均自由采食饮水，饲养室温光条件与环境一致。预饲１周后，按雌雄比例２∶１配种，当晚将雄鼠放进雌鼠笼内，次日早晨检查母鼠，若有阴栓的判定为怀孕第一天。妊娠至第１５天时禁食２４ ｈ，脱颈椎处死母鼠，用吸水纸吸取多余的水分后分别测每组胎仔数，用电子天平测每个胎仔重、子宫胎盘重，ＩＵＧＲ数（即低于正常胎鼠平均体重１０％的胎鼠数）；用荧光光度法测子宫组胺（ＨＡ）含量；ＮＯＳ试剂盒测子宫组织ＮＯＳ活力；Ｃａｒｎｏｙ’ｓ固定，甲苯胺蓝染色（Toluidine blue，TB）显示ＭＣ；ＮＢＦ固定，吖啶橙（Ａｃｒｉｄｉｎｅ－Ｏｒａｎｇｅ，ＡＯ）显示子宫肝素阳性细胞；ＣＤ３４试剂盒进行微血管密度（Ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ，ＭＶＤ）显色。
１．３ 数据处理
各组试验数据均以平均数±标准误表示，用ＳＰＳＳ１３．０软件中Ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ进行统计分析。
２ 结果与分析
２．１ 小鼠胚胎生长发育指标测定结果
由表１可见，５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组平均胎仔重较对照组显著（Ｐ＜０．０５）增加；子宫胎盘重随拌饲的ＱＡＨＲ剂量升高而增高，且７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组较对照组显著（Ｐ＜０．０５）增加；７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组胎仔数较对照组显著（Ｐ＜０．０５）增加；５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组ＩＵＧＲ数较对照组显著（Ｐ＜０．０５）减少。而２５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组与对照组相比各项指标差异均不显著。
２．２ 小鼠子宫ＭＣ和肝素阳性细胞的分布
经ＴＢ与ＡＯ染色的切片观察，孕小鼠子宫ＭＣ及肝素阳性细胞均主要分布于肌层近血管处，外膜中较少，内膜内极少（图１～５）；由表２可见，５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组小鼠子宫ＭＣ及肝素阳性细胞数较对照组均显著（Ｐ＜０．０５）增加，２５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组小鼠子宫ＭＣ及肝素阳性细胞数与对照组相比差异不显著。
２．３ 小鼠子宫ＨＡ含量与ＮＯＳ活力测定
由表３可见，５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组小鼠子宫ＨＡ含量较对照组显著（Ｐ＜０．０５）降低，而子宫组织ＮＯＳ活力较对照组显著（Ｐ＜０．０５）升高，２５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组小鼠子宫ＨＡ含量和ＮＯＳ活力与对照组相比差异不显著。
２．４ 子宫微血管的分布
ＣＤ３４具有染色强、背景清晰、易计数的特点。阳性细胞呈棕黄色条索状排列，广泛分布于子宫组织的毛细血管内皮细胞，许多含有多层平滑肌成分的厚壁大腔血管内皮细胞同时也着色（图６～８）。由表４可见，５００ ｍｇ／ｋｇ和７５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组小鼠子宫ＭＶＤ较对照组显著（Ｐ＜０．０５）增多，而２５０ ｍｇ／ｋｇ ＱＡＨＲ组小鼠子宫ＭＶＤ与对照组相比差异不显著。
３ 小结与讨论
３．１ ＱＡＨＲ对孕鼠子宫ＭＣ及其主要介质的影响
子宫内ＭＣ的研究是生殖学的重要内容［４］，其释放的活性介质ＨＡ具有舒张血管平滑肌和松弛子宫平滑肌的作用，ＨＰ有改善低氧血症和微循环等作用［５］，ＮＯ有舒张血管和降低血管阻力的作用，而且还有促血管生成的作用［６］。
本试验中，ＡＯ染色显示的小鼠子宫肝素阳性细胞与ＴＢ染色显示的ＭＣ形态与分布十分相似，主要分布于肌层近血管处，外膜中较少，内膜中极少而不易看见，形态多样，大小不一，胞浆内有大小不等的颗粒。ＭＣ和肝素阳性细胞在数量上随ＱＡＨＲ呈剂量依赖性升高，肝素是ＭＣ合成和分泌的主要介质［７］，ＮＯＳ是调节内源性ＮＯ产生的关键因素［８］。本试验中小鼠子宫、胎盘ＨＡ随ＱＡＨＲ剂量的升高而降低，ＮＯＳ活力随ＱＡＨＲ剂量的升高而升高。且本试验中小鼠胚胎生长发育相关指标随ＱＡＨＲ添加剂量的升高均有升高，ＩＵＧＲ数减少。综合分析认为可能是ＱＡＨＲ促进孕鼠子宫ＭＣ调控其主要介质释放共同调节孕鼠子宫微血管生成、改善低氧血症、改善微循环、促进子宫平滑肌舒张和调节胚胎发育的结果［９，１０］ 。
３．２ ＱＡＨＲ对孕鼠子宫微血管生成的促进作用
妊娠期间，血管发生和血管化是胚胎生长发育的基础［１１］。ＭＣ可以刺激血管内皮细胞增生，ＮＯ能促使血管内皮生长因子等物质产生［９］；ＨＡ在体内外均有促血管生成的作用；ＨＰ能特异性刺激毛细血管内皮细胞迁移和血管构成［１１］；ＱＡＨＲ对鸡胚尿囊膜血管生成也有明显的促进作用［１２］。
本研究采用内皮细胞特异性较高的ＣＤ３４抗原标记子宫微血管，可见阳性细胞呈棕黄色，广泛分布于子宫组织的毛细血管内皮，许多含有多层平滑肌的血管也有着色，具有染色强、背景清晰、易计数的特点。在数量上，小鼠子宫ＭＶＤ有随ＱＡＨＲ剂量增加呈依赖性升高的趋势。由此可见，ＱＡＨＲ可能通过调节子宫内ＭＣ促血管生成因子的释放和其本身的促血管生成作用双向调节血管生成，使子宫内微血管数目增加，进而促进母仔间的营养供给和加速代谢产物排除，为子宫内胎儿的生长发育提供充足的氧和营养素，这可能是ＱＡＨＲ防治ＩＵＧＲ 的部分机理。
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