王 沛 李建定
（河南省医药学校，河南 开封 475001）
【摘 要】超高效液相色谱串联质谱法（Ultra - high performance liquid chromatography - tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）结合了超高效液相色谱强大的分离能力和质谱在定性、定量分析方面的高灵敏度及专属性强优势，较好地适应了现代药物研究对自动化、高通量分析方法的需求，已成为药物分析的重要方法之一。综述了UPLC-MS/MS 法在药物成分分析领域的应用研究进展。
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关键词 UPLC-MS/MS；药物成分分析
液质联用技术由液相色谱、质谱及接口技术三部分组成，相对于通常的检测方式，能提供更优越的选择性和更低的检测限，已成为现代实验室一种快速、准确的分析工具。超高效液相色谱（UPLC）是美国Waters公司于2004年3月正式推出的分离科学新技术。它是基于小颗粒填料和LC原理的一种创新方法，实现了超高分离度、灵敏度和分析速度。质谱（MS）是离子，如分子离子，碎片离子等按质荷比（m/z）大小而依次排列的谱图，通过对样品气相离子质荷比大小和丰度的测定进行化合物的组分分析和结构分析，是化合物的“化学指纹图谱”之一。
UPLC是质谱检测器的最佳液相色谱入口，除UPLC本身带来的速度、灵敏度和分离度的改善外，UPLC的超强分离能力有助于目标化合物与之竞争电离的杂质的分离，从而可以使质谱检测器的灵敏度因离子抑制现象的减弱或克服而得到进一步的提高。UPLC与MS联用，可以充分发挥两者的优势，与传统的高效液相色谱和质谱联用（HPLC-MS）相比，显著提高了定量分析的重复性和可靠性以及定性分析的准确性，较好地适应了现代药物研究对自动化、高通量分析方法的需求，已成为药物分析的重要方法之一[1-4]。本文综述了UPLC-MS/MS法在药物成分分析领域的应用研究进展。
1 药物成分的快速化学表征
王邱等以超高效液相为分离手段，飞行时间质谱仪为鉴定方法，水饱和正丁醇为提取溶剂，以0.05%甲酸水（A）-0.05%甲酸乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱，采用ESI负离子模式进行数据采集。根据实验结果，并结合相关教育期刊网 http://www.jyqkw.com
参考文献，二级质谱裂解数据以及元素组成，分离、鉴定出17种皂苷类成分，并发现三七中含有姜糖酯B成分。实验结果表明经过超高效液相的分离，及质谱二级负离子信息的鉴定，为分析三七中皂苷类成分提供了一种快速、简便、可靠的方法，能够为三七药材在真伪鉴别、质量评价、药代动力学等方面的研究提供方法基础[5]。
王金凤等建立超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）方法，分离表征葛花中异黄酮成分。利用LTQ超高效液相色谱-质谱系统（美国，Therm公司），研究经乙酸乙酯纯化的葛花乙醇提取物，分离出7种异黄酮成分，经鉴定为大豆苷、大豆苷元、鸢尾苷、鸢尾苷元、染料木黄酮、印度黄檀苷和鸡豆黄素。样品中异黄酮成分分离度较好，基线平稳，分离效果理想，快速、准确、灵敏度高，可以作为葛花异黄酮鉴定的有效方法[6]。
池玉梅等以黄酮对照品为研究前体，药用植物小毛茛为研究对象，采用超高效液相色谱/二极管阵列检测器－电喷雾四极杆串联飞行时间质谱（UPLC/DAD-ESI/Q-TOF MS）分析了黄酮类化合物同系物及同分异构体的色谱、质谱特性。结果显示：黄酮氧苷和黄酮碳苷的紫外吸收光谱及二级质谱具有显著性差异，糖苷化位置同保留时间、二级质谱碎片及相对丰度具有相关性。将该方法应用于小毛茛茎叶醇提液的分析，结合其酸水解液的分析，解析了22个黄酮醇糖苷和3个苷元[7]。
2 药物成分含量测定
罗玲等建立了检测注射用双黄连粉针剂中7种活性成分（绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、连翘酯苷A、黄芩苷、连翘苷）含量的UPLC-MS/MS方法。采用Agilent Zorbax C18色谱柱（2.1mm×50mm，1.7μm），流动相乙腈-0.1％甲酸，梯度洗脱，体积流量0.40mL·min-1，柱温30℃；质谱条件为电喷雾离子（ESI）源，负离子模式检测，多重反应监测（MRM）扫描。7个活性成分在考察的线性范围内，进样浓度与峰面积之间线性关系良好（r>0.9983），精密度RSD<4.2％；重复性RSD<6.3％，平均加样回收率在92.2％～102.7％。该方法准确、快速、重复性好，可作为双黄连粉针剂的质量控制参考方法[8]。
顾瑶华等以Agilent Z0RBAx Eclipse XDB-C18为色谱柱，以乙腈-0.1％甲酸水溶液（梯度洗脱）为流动相，使用超高速液相色谱仪（Agilent 1200 UPLC，德国）和三重四级杆质谱仪（Agilent QQQ-MS/MS 6410A，美国，），建立同时测定五味消炎灵含片中丹参酚酸、黄芩苷、葛根素、绿原酸、咖啡酸含量的UPLC-MS/MS方法。结果所检测的各色谱峰分离度良好，方法学实验结果符合要求；该方法可以为五味消炎灵含片的质量控制提供依据[9]。
范晓苏等建立了同时测定复方杏香兔耳风胶囊中原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、野黄芩苷、异绿原酸C、黄芩苷、木犀草素、芹菜素、白术内酯III和白术内酯I等10种有效成分含量的UPLC-MS/MS双内标分析方法。以咖啡酸和淫羊藿苷为内标（IS），在ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 色谱柱上，以甲醇和含0.3％甲酸的水为流动相进行梯度洗脱分离，流速为0.3moL/min。在电喷雾电离（ESI）正、负离子切换模式下，采用多重反应监测模式进行检测。结果表明，原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、野黄芩苷、异绿原酸C、黄芩苷、木犀草素、芹菜素、白术内酯III和白术内酯I的线性范围分别为0.00300～24.0mg/L、0.0170～2.00mg/L、0.0150～30.0mg/L、0.00400～30.0mg/L、0.0105～24.0mg/L、0.00300～30.0mg/L、0.00300～5.00mg/L、0.00600～5.00mg/L、0.00150～4.00mg/L、0.00600～0.900mg/L；检出限分别为1.0、11、5.0、1.5、3.5、1.0、1.0、2.0、0.5、0.2μg/L。10种成分的加样回收率为92.5％～106％，相对标准偏差均不大于3.2％。该方法快速简便、灵敏度高、重复性好，已成功用于实际样品的分析[10]。
3 中药制剂中非法加入化学药物成分检测
黄卫平等使用Acuity UPLC超高效液相色谱系统（Waters公司）和Synapt G2四极杆/飞行时间串联质谱仪（Water公司），通过比较样品峰与对照品峰的保留时间、一级质谱和二级质谱碎片离子，建立了测定抗风湿类中药制剂中非法添加醋酸泼尼松、萘普生、醋酸地塞米松、双氯芬酸钠、吲哚美辛和布洛芬的UPLC-MS/MS分析方法。实验结果表明，采用UPLC-MS/MS技术，将高效液相色谱的高分离能力与质谱分析的高选择性相结合，抗风湿类中药制剂样品经一次提取即可快速、准确地对非法掺入醋酸泼尼松、萘普生、醋酸地塞米松、双氯芬酸钠、吲哚美辛和布洛芬进行多级质谱分析，并进行了结构确证，灵敏度高，选择性强，增强了检测结果的可信度，对该类中药制剂的质量控制具有现实意义[11]。
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参考文献
［1］黄昆，王文辉，等.超高效液相色谱和质谱联用在药物研究领域的应[J].光谱实验室，2009，26（4）:922-930.
［２］王勇跃，梁健谋，等.UPLC梯度洗脱法测定注射用阿洛西林钠中有关物质[J].中国抗生素杂志，2015，40（3）:192-196.
［３］Ying Ding， Kai Huang， et al. Simultaneous quantitative analysis of dextromethorphan， dextrorphan and chlorphenamine in human plasma by liquid chromatography–electrospray tandem mass spectrometry [J]. Journal of Chromatography A， 2011，1218（41）:7371-7376.
［４］LU Chun-mei1， WANG Ming-tai et al. Determination of Sex Hormones in Antler Velvet by High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry [J]. CHEM. RES. CHINESE UNIVERSITIES， 2012，28（2）:191-194.
［５］王邱，冯毅凡，等.UPLC /Q-TOF MS 对三七中皂苷类成分的快速化学表征[J].天然产物研究与开发，2014，26:1233-1239.
［６］王金凤，魏颖，等.超高效液相色谱串联质谱法检测葛花中异黄酮[J].中成药，2014，36（10）:2125-2127.
［７］池玉梅，李瑶，等.超高效液相色谱－四极杆串联飞行时间质谱分析黄酮类化合物及小毛茛茎叶的成分[J].色谱，2013，31（9）:838-844.
［８］罗玲，黄玉婵，等.UPLC-MS-MS同时测定双黄连粉针中7种活性成分[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（13）:80-84.
［９］顾瑶华，巢为农.UPLC-MS/MS测定五昧消炎灵含片中5种成分的含量[J].南京中医药大学学，2014，30（6）:578-580.
［１０］范晓苏，庞倩，等.超高效液相色谱－串联质谱双内标法同时测定复方杏香兔耳风胶囊中的10种有效成分[J].色谱，2014，32（3）:216-223.
［１１］黄卫平，李琴，等.超高效液相色谱－四极杆飞行时间质谱测定抗风湿类中药非法添加的化学药物成分[J].中华中医药学刊，2014，32（11）:2707-2714.
［责任编辑：汤静］