彭肇强1、2 秦立强1
1.苏州大学公共卫生学院营养与食品卫生系，江苏苏州 215123；2.国药集团致君（苏州）制药有限公司，江苏苏州 215400
[摘要] 目的 注射用头孢呋辛钠溶液颜色不稳定，该研究探讨在原料生产过程贮存条件和充氮与否对色级稳定性的影响。方法 2013年2—3月生产的194批无菌原料药每批各8瓶分别贮存冷处和阴凉处，其中4瓶模拟生产过程充入高纯液氮， 0、3、6、12个月按《中国药典》溶液颜色检查法的第一法观察颜色变化。将色级<YG1规定为0.5，色级=YG1规定为1.0，依次类推。比较冷库和阴凉库贮存、充氮与不充氮情况下色级的差异。结果 在不充氮情况下，阴凉库贮存12个月已有19.1%批次的达到最高色级<6，而冷库只有7.2%批次的达到最高色级=5。阴凉贮存条件下，3、6和12个月后充氮原料药的色级比不充氮分别下降了0.6、0.8和0.7，而冷库贮存条件下色级则分别下降了0.2、0.5和0.7。结论 原料冷处贮存时色级稳定性明显好于阴凉贮存，原料充氮时色级稳定性明显好于不充氮。
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关键词 头孢呋辛钠；色级；充氮；原料
[中图分类号] R978.1[文献标识码] A[文章编号] 1674-074２（２０１4）11（a）－０147-03
头孢呋辛钠为第二代头孢菌素类抗生素，分装而成的注射用头孢呋辛钠治疗范围广、副反应少，广泛应用于临床[1]。但是该品稳定性差[2]，在全国药品评价抽检试验中，注射用头孢呋辛钠不符合要求的主要项目为溶液颜色，在各类终端市场反馈中，注射用头孢呋辛钠溶液颜色为最主要的投诉项目。
2005版《中国药典》规定头孢呋辛钠贮存条件为遮光，密封，在冷处（2~10℃）贮存；2010版《中国药典》规定该品贮存条件为遮光，密封，在阴凉处（≤20℃）贮存[3]。充氮可以有效保证注射用头孢呋辛钠稳定性，延缓色级变化，但头孢呋辛钠原料充氮对延缓色级的作用没有引起关注，该研究把头孢呋辛钠色级控制由制剂环节推移到前段工序进行控制，即在原料生产过程中进行充氮，同时探索不同贮存条件下，原料充氮对产品的色级稳定性影响。2013年2—3月生产的194批无菌原料药每批各8瓶分别贮存冷处和阴凉处，现报道如下。
1材料与方法
1.1试剂与仪器
头孢呋辛钠无菌原料药（纯度≥99.4%）；液氮（纯度≥99.995%）；EDTA-2Na（AR级）。GS1M型残氧仪。
1.2原料药模拟
实际生产过程中，原料混合前脉动两次抽真空，分装前在铝桶中充高纯液氮，再装药粉，再充氮，盖上组合盖，尽快轧盖密封。但该研究中无法大批量在同一批产品中部分桶充氮、部分桶不充氮来采集数据，因此采取模拟小包装代替成品包装。模拟小包装充氮方式为在减压阀控制压力（0.01±0.005 MPa）下，微开小铝瓶胶塞，将充氮软管伸入到小铝瓶中约1 cm，持续充高纯液氮1 min，拔出软管，立即盖上胶塞，扣上铝盖，使用手动轧盖器轧盖，检查小铝盖不能拧动为准。充氮后的产品通过残氧仪检测残氧量。
1.3取样以及处理
取无菌原料药车间2013年2月和3月生产的头孢呋辛钠共194批（批号13024001~ 13024067、13024201~13024253、13034001~13034040、13034201~13034234）样品。每批取样16瓶（每瓶30g），8瓶存放于阴凉库（10~20℃），8瓶存放于冷库（6~10℃）。两种贮存条件下分别在4瓶中充氮，4瓶中不充氮。充氮残氧量控制在4%以下。存放3、6、12个月时随机各取1瓶检测颜色（每批每种条件多备有1瓶样品）。
1.4色级判定
颜色判断按《中国药典》2010版二部附录ⅨA 《溶液颜色检查法》第一法检测[4]。取该品1.2 g，加入0.05 mol/L EDTA-2Na溶液10 mL使溶解，置于25 mL纳氏比色管中，另取规定色调和色号的标准比色液10 mL，置于另一25 mL的纳氏比色管中，两管同置白色背景上，自上向下透视，或同置白色背景前，平视观察；供试品管呈现的颜色与对照管比较，不得更深。为了量化分析，将色级<YG1规定为0.5，色级=YG1规定为1.0，色级<YG2规定为1.5，依次类推。
1.5统计方法
采用spss17.0软件研究数据进行统计学处理，色级以平均值±标准差表示，单因素方差分析（ANOVA）比较组间的差异，如组间存在差异，则采用LSD-t检验进行组间多重比较。
2结果
194批头孢呋辛钠原料起始颜色较浅，除一批次色级为<3，其他色级均<2。每种贮存方式色级均随时间推移而加深。冷库贮存色级变化慢于阴凉库贮存，以不充氮贮存12个月为例，冷库贮存仍有1、2和10批次色级分别为<2、=2和<3的较浅颜色，而阴凉库贮存只有6批次为色级<3。充氮保存色级变化慢于不充氮保存，以冷库贮存12个月为例，充氮后贮存仍有21、12和45批次色级分别为<2、=2和<3的较浅颜色，而不充氮贮存则分别为1、2和10批次（表1）。
冷库贮存条件下，3、6和12个月后充氮原料药的平均色级比不充氮低0.2、0.5和0.7，其中6和12个月差异有统计学意义（t=6.46; t=7.82, P<0.01）；阴凉条件下，3、6和12个月充氮原料药的平均色级比不充氮低0.6、0.8和0.7，差异有统计学意义（t=8.18; t=9.65; t=6.28, P<0.01）。另外，不充氮的情况下6和12个月后冷库中原料药色级显著低于阴凉库，差异有统计学意义（t=7.35; t=8.54, P<0.01）；充氮情况下3、6和12个月后冷库中原料药色级显著低于阴凉库（t=6.14; t=10.09; t=6.93, P<0.01）。原料药贮存在冷库不充氮与阴凉条件充氮色级变化基本一致（见表2）。
3讨论
头孢呋辛钠稳定性差，与原料质量、温度、光照、充氮等因素有关[5]。药物颜色与规定颜色的差异能在一定程度上反映药物的纯度[6]，周颖等对国内上市注射用头孢呋辛钠进行了全面的质量分析，结果发现169批次中5批次不符合规定，其中4批次颜色超标，因此颜色是影响该药质量的主要因素之一[7]。颜色测定方法有目测法[4]、紫外-可见分光光度法[8]、HPLC法[6，9，10]等，但药典中《溶液颜色检查法》第一法检测颜色检测直观、快速、检测成本低，因此该研究选用颜色作为观察指标。
该次研究采取模拟小包装代替成品包装在存放的3、6、12个月时动态观察原料生产阶段充氮与否和贮存方式对产品色级的影响，结果发现头孢呋辛钠原料充氮比不充氮色级稳定性明显好，溶液颜色变化较慢。周颖等采用专题调查的方法考察了不同生产工艺的优劣，结合对生产企业提供的产品长期稳定性数据的分析，得出高纯氮气保护工业的样品的稳定性明显高于无高纯氮保护工艺的样品，表现为溶液颜色较浅和头孢呋辛钠聚合物含量较低，该调查的结论和该研究结果一致[7]。赵龙山等采用热分析法和差式扫描量法测定头孢呋辛钠在氮气和空气中的热分解动力学参数，结果发现在空气中表观活化能为139.2、139.3 kJ/mol，在氮气中为106.8、108.5 kJ/mol，因此在氮气中更为稳定[2]。
该研究显示原料冷处贮存比阴凉贮存色级稳定性明显好，溶液颜色变化较慢。饶春意等分析了头孢呋辛钠溶液短期放置对杂质含量的影响，发现放置0、10、20、30和60分钟后杂质含量分别为0.201%、0.205%、0.219%、0.224%和0.240%，即随时间延长稳定性降低[6]。刘华等直接观察了头孢呋辛钠在不同温度下对色级的影响，5℃贮存30 d色级为1，10℃、20℃、30℃和40℃下色级分别为1、1、3和7[5]。尽管在10℃、20℃的阴凉条件下贮存30 d（1个月）对色级没有明显影响，但我们的研究把贮存时间延长到3、6和12个月，发现阴凉贮存色级变化较冷处贮存显著，因此，虽然2010版《中国药典》将原料和制剂的储藏条件由“在冷处保存”改为“在阴凉处保存”[3]，我们的研究结果仍建议原料贮存于冷库中。
目前普遍关注头孢呋辛钠制剂和溶液的稳定性[2，5-7]，该研究则关注了原料稳定性。原料药充氮，不仅可以延缓药品被氧化的速度，还可以使桶内与桶外保持微正压，有效保障药品不受外界环境影响。但是必须注意的是无菌原料药采用铝桶分装，口径较大，充氮效果不易控制，因此关于原料药充氮方式还有进一步改进的空间，如可以考虑在隔离罩中充氮。目前，我国对药品制剂有效期的规定仍以制剂分装日期为起始日期，因此，建议原料药存放时间越短越好，尽早分装成制剂，有利于保证制剂在有效期