摘 要：目的 对Alegria全自动自身免疫分析仪与配套试剂[酶联免疫吸附试验（ELISA）]组成的检测系统（简称Alegria系统）定量检测抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）IgG抗体的性能进行验证。方法 参考美国临床实验室标准化协会（CLSI）相关文件和中国卫生行业标准WS/T 494—2017，对Alegria系统检测抗MCV IgG抗体的精密度、正确度、线性范围和参考区间进行验证。结果 Alegria系统检测抗MCV IgG抗体高、低值样本的批内精密度分别为6.50%、4.39%，批间精密度分别为7.32%、5.42%，均<10%。高、低值定值标准品的验证区间均包含定值，且相对差值均<15%。线性回归方程为Y=1.027 X-5.17(r2=0.993)，实测值与预期值的相对偏移均<15%。20名健康体检者的血清抗MCV IgG抗体检测结果仅有1名超出厂家声明的参考区间（0～20 U/mL），参考区间验证通过。结论 Alegria系统检测抗MCV IgG抗体的精密度、正确度、线性范围、参考区间均符合要求，可用于临床检测。
关键词：抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体 酶联免疫吸附试验 性能验证
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种慢性、系统性自身免疫性疾病，主要病理特征为对称性、侵蚀性关节炎[1-2]，发病率为0.5%～1.0%[3]。目前，RA的诊断除依靠临床症状、X线检查外，还需结合血清学指标。有研究结果显示，血清抗突变型瓜氨酸波形蛋白（mutated citrullinated vimentin,MCV)Ig G抗体与RA患者病情活动程度及影像学改变密切相关[4]。及时、准确、高效地检测抗MCV Ig G抗体浓度对于RA的早期筛查及疾病活动度监测至关重要。目前，针对临床化学定量分析的方法学评价已较为成熟，但酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）属于免疫学检测方法，有不同于临床化学定量分析的特点。因此，本研究参考美国临床实验室标准化协会（the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）相关文件[5-9]和我国卫生行业标准WS/T 494—2017[10]，对江苏大学附属人民医院检验科引进的Alegria全自动自身免疫分析仪及配套试剂（ELISA）组成的检测系统（简称Alegria系统）定量检测抗MCV Ig G抗体进行性能验证。
1 材料和方法
1.1 样本来源
收集2019年1—3月江苏大学附属人民医院检验科检测抗MCV Ig G抗体且符合实验要求的样本，制备混合血清。同时收集20份健康体检者血清样本。所有样本均按要求离心分离血清后置于-20℃保存待用。所有样本均无明显溶血、脂血、黄疸等。
1.2 仪器与试剂
A l e g r i a全自动自身免疫分析仪（德国ORGENTEC公司）及配套抗MCV Ig G抗体测定试剂盒（ELISA）、校准品。由于每个检测条均自带质控孔，因此每次测试只要仪器报告“passed”，即可判定质控合格。每次检测时只有质控通过方可判定测定结果有效。
1.3 性能验证
1.3.1 精密度验证
根据CLSI EP15-A2文件[7]要求，对高值[（500±40)U/m L]样本、低值[（40±5)U/m L]样本连续重复测20次，用于评估批内精密度[用变异系数（coefficient of v a r i a t i o n,C V）表示]；每天对高、低值样本重复检测4次，连续检测5 d，用于评估批间精密度（CV）。如精密度符合厂商声明（CV≤10%），则验证通过。
1.3.2 正确度验证
参考CLSI EP15-A2文件[7]要求，每天重复测定2次高值（300 U/m L）、低值（40 U/m L）定值标准品，连续测定5 d，计算检测结果的x、s及验证区间。
1.3.3 线性范围验证
参考CLSI EP6-A文件[8]要求，取高值[（500±40)U/m L，标记为H]和低值[（40±5)U/m L，标记为L]混合血清各1份，按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配成6个系列浓度样本（标记为S1～S6）。分别对S2、S4进行10次检测，计算x，根据公式计算低值样本和高值样本的预期浓度值：L=(3×S2-S4）/10;H=(2×S4-S2）/5。按比例关系计算其他样本的预期浓度值。将6个系列浓度样本随机重复检测5次，计算x，作为各自的实测值。以预测值为横坐标、实测值为纵坐标绘图，进行回归分析，计算各样本预期值与实测值的相对偏移，相对偏移（%）=（预测值-实测值）/预测值×100%。如结果满足r2≥0.99且相对偏移<15%，则线性范围验证通过。
1.3.4 参考区间验证
参考C L S I C 2 8-A 3文件[9]要求，选取江苏大学附属人民医院健康体检者20名，其中男10名、女10名，年龄21～76岁。严格按标准操作规程，采用Alegria系统检测抗MCV Ig G抗体。如检测结果有≤10%在厂商声明的参考区间外，则参考区间验证通过。
2 结果
2.1 精密度验证结果
A l e g r i a系统检测高、低值样本的批内C V分别为6.5 0%、4.3 9%，批间C V分别为7.3 2%、5.4 2%，均低于厂商声明的精密度（CV≤10%），精密度验证通过。见表1。
表1 精密度验证结果
2.2 正确度验证结果
低值定值标准品的实测值为40.71 U/m L,s为1.01 U/m L，验证区间为37.43～43.99 U/m L；高值定值标准品的实测值为289.78 U/m L,s为4.36 U/m L，验证区间为275.63～303.93 U/m L。高、低值定值标准品的验证区间均包含定值，且相对差值均<15%，正确度验证通过。
2.3 线性范围验证结果
线性回归方程为Y=1.027 X-5.17(r2=0.993），实测值与预期值的相对偏移均<15%，厂商声明的线性范围（89.2～726.6 U/m L,r2≥0.95）验证通过。见表2、图1。
表2 6份系列浓度样本检测结果
图1 Alegria系统检测抗MCV Ig G抗体的线性拟合曲线
2.4 参考区间验证结果
2 0名健康体检者的血清抗M C V I g G抗体检测结果仅有1名超出厂商声明的参考区间（0～20 U/m L），参考区间验证通过。
3 讨论
检测系统良好的性能是保证检验结果准确的前提[11]。本研究参考CLSI相关文件[5-9]和我国卫生行业标准WS/T 494—2017[10]，对Alegria系统检测抗MCV Ig G抗体的精密度、正确度、线性范围及参考区间进行了验证。结果显示，Alegria系统检测抗MCV Ig G抗体高、低值样本的批内精密度分别为6.50%、4.39%，批间精密度分别为7.32%、5.42%，符合厂商声明的精密度要求。高、低值定值标准品的验证区间均包含定值，且相对差值均<15%，正确度验证通过。线性回归方程为Y=1.027 X-5.17(r2=0.993），实测值与预期值的相对偏移<15%，厂商声明的线性范围（89.2～726.6 U/m L）验证通过。20名健康体检者的血清抗MCV Ig G抗体检测结果仅有1名超出厂商声明的参考区间（0～20 U/m L），参考区间验证通过。
Alegria系统与其他自身免疫项目检测系统相比，具有以下几大优势：（1）检测项目广，可检测包括抗MCV Ig G抗体在内的80余种免疫学项目；（2）自带温控温育系统，稳定性、重复性均较好；（3）通量高，90 min可检测30份不同的样本；（4）样本用量少，灵敏度和抗干扰能力均较强[12]。
综上所述，Alegria系统检测抗MCV Ig G抗体的精密度、正确度、线性范围、参考区间均符合要求，具有良好的检测性能，可用于临床检测。
参考文献
[1] ESCARCEGÁR O, LIPINSKI M J, GARCÍACARRASCO M,et al. Inflammation and atherosclerosis:cardiovascular evaluation in patients with autoimmune diseases[J]. Autoimmun Rev,2018,17(7):703-708.
[2]张一超，张伟群，杨佳，等. RA患者RDW水平变化及其与ESR、CRP和RF的关系[J].检验医学，2019,34(5):441-442.
[3] SILMAN A J,PEARSON J E. Epidemiology and genetics of rheumatoid arthritis[J]. Arthritis Res,2002,4(Suppl3):S265-S272.
[4]杨莉娟，陈楚涛，张学培，等.抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的应用[J].新医学，2020,51(9):667-671.
[5] Accreditation criteria for quality and competence of medical laboratories[S]. ISO 15189:2012,2012.
[6] Clinical and Laboratory Standards Institute. Assessing the quality of immunoassay systems:radio immunoassays and enzyme，fluorescence and luminescence immunoassays[S].I/LA23-A,CLSI,2004.
[7] Clinical and Laboratory Standards Institute. User verification of performance for precision and trueness[S]. EP15-A2,CLSI,2005.
[8] Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach[S]. EP6-A,CLSI,2003.
[9] Clinical and Laboratory Standards Institute. Defining,establishing and verifying reference intervals in the clinical laboratory[S]. EP28-A3c,CLSI,2010.
[10]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. WS/T 494-2017临床定性免疫检验重要常规项目分析质量要求[S].北京：中国标准出版社，2017.
[11]林斐然，刘文彬，欧元祝，等. 11种同型半胱氨酸检测系统的性能评价[J].检验医学，2019,34(1):51-55.
[12]吴勰，王辰佳，许迅辉. Alegria全自动免疫分析仪在临床使用中的维护[J].医疗装备，2020,33(3):132-133.