刘运华 廖悦余 吴东恩
【摘要】目的调查分析广东河源地区妇女宫颈感染HPV基因型别的分布情况，为预防HPV感染和宫颈癌防治提供实验诊断依据。方法
采用基因芯片技术对1 037例妇女的宫颈脱落细胞标本行21种HPV基因型别检测，并对227例阳性患者中的163例进行病理活检。结果
1 037例受检妇女中感染HPV 227例，感染率为21.89%，检出20种基因型，共314项，高危型269项，占85.67%；低危型45例，占14.33%，未检出基因亚型为42。高危型感染率排在前五位的依次是HPV52（18.47%）、HPV16（11.78%）、HPV58（11.15%）、HPV53（7.32%）、HPV18（5.1%）；低危型以HPV11、HPVCP8304与HPV6多见。单一感染171例，占75.33%，双重感染34例，占14.98%，多重感染22例，占9.69%。HPV感染率最高在30~39岁年龄组，阳性率为26.56％。163人进行病理活检，137人有宫颈组织病变，病变率达到84%。结论河源地区妇女HPV总感染率较高，HPV基因分型检测对宫颈癌的预防、早发现和早诊疗具有重要临床意义。
【关键词】人乳头瘤病毒 基因分型 宫颈癌 基因芯片技术
doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2014.11.034
人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus, HPV），是一种专性感染人表皮和粘膜鳞状上皮的病毒，分为100多种亚型，近40种亚型与生殖道感染有关，约20种亚型与宫颈癌相关。目前，国内外已公认HPV感染是导致宫颈癌的主要病因，并依据HPV型别与癌发生的危险性高低将HPV分为高危型和低危型两类。低危型主要与生殖器疣有关，高危型则与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生密切相关［1］。本文通过调查分析河源地区妇女宫颈感染HPV基因型别的分布情况，更好地为本地区宫颈癌的预防、早发现和早诊疗提供可靠的实验数据。现将相关情况报告如下。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究对象 对2013年3月~2014年6月在我院妇科门诊检查和体检的1 037名妇女进行HPV-DNA分型检测，受检者均有性生活史1年以上，年龄16~61岁，平均34.67岁。对227例HPV阳性患者中的163例（年龄19~57岁）行阴道镜检查后，在镜下多点活检或颈管搔刮送病理。
1.1.2试剂及仪器运用凯普HybriMax医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒同时进行21种亚型检测，包括15种高危型和6种低危型。Haier（HR-PCR-96G）梯度基因扩增仪，凯普医用核酸分子快速杂交仪。巴氏染色液，奥林巴斯显微镜等。
1.2方法
1.2.1HPV-DNA分型检测采用塑料颈管毛刷收集宫颈管和宫颈外口的脱落细胞，将颈管毛刷在盛有细胞保存液的小瓶中涮洗，在管口处将多余的刷柄折断，将刷头留在样本管中送检。运用凯普HybriMax医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒作病毒分型检测。实验步骤：①脱落细胞中DNA的提取。②聚合酶链反应（PCR）扩增。③快速杂交。④观察结果：只有Biotin对照点及内对照点（IC）点同时显色才是有效结果；如果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点，但IC点不显色亦是有效结果，见图1~图3。探针在膜条上的排列顺序为Biotin、6、11、42、43、44、IC、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304、空白点。⑤结果判读:只要有1种亚型阳性即为 HPV感染，2种或2种以上亚型阳性为 HPV多重感染。
1.2.2阴道镜检查及镜下多点活检或颈管搔刮送病理科，组织病理学常规制片、巴氏染色、镜检分析。诊断标准参考2003年版WHO《乳腺及女性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》，将组织细胞病变进行分型。
1.2.3统计学处理应用卡方检验进行统计学分析，p＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.11 037例受检妇女中HPV阳性227人，感染率为21.89%，21种基因型中检测出20种亚型，HPV42亚型未被检出，共314项，高危型269项，占85.67%；低危型45例，占14.33%。各亚型感染分布情况见表1。
2.2将1 037例受检妇女从≤19岁开始到≥50截止，以10岁为一个年龄段，共分为5组。感染人群以30~39岁年龄组为主，筛查人数最多，阳性率最高；组间差异存在统计学意义（X2＝11.22，p<0.05）,以单一感染为主，整个感染分布情况呈正态分布。多重感染22例（9.69%，22/227），其中三重感染17例（7.48%，17/227），四重感染2例（0.88%，2/227），五重感染2例（0.88%，2/227），六重感染1例（0.44%，1/227）。见表2。
2.3高危型HPV与宫颈组织病变的相关性
227例HPV阳性患者中有163人进行病理活检，137人有宫颈组织病变，病变率达到84%，其中慢性宫颈炎27人；CINⅠ32人；CINⅡ/Ⅲ68人；宫颈癌10人。在137例宫颈组织病变患者中，感染率排在前五位的高危型HPV分别为52(34.3%)、16（27%）、58(24.09%)、18(11.68%)、33(6.57%)。
3讨论
3.1HPV基因亚型感染存在地区差异
河源地区筛查的1 037例妇女的HPV感染率为21.89%，与深圳（21.15%）［2］和佛山（20.7%）［3］、衡阳地区（20.12%）［4］较为接近，高于辽沈地区（14.65%）［5］，低于重庆地区（37.3%）［6］，这可能与地区差异性有关。227例阳性样本的各亚型分布情况，高危型以HPV52、16、58、53、18为主，低危型以HPV11、CP8304、6为主，与佛山地区妇女HPV感染的亚型前5位HPV52、16、58、56、18［3］及衡阳地区妇女HPV感染高危型以HPV52、16、58 为主，低危型以HPV11、6［4］为主基本接近。
3.2年龄与HPV感染的相关性
有研究报道表明，HPV感染情况与年龄有一定的关系。对于年轻女性，由于性生活频繁而感染HPV的机会增多［7］；而对于年长女性，又处于绝经期、卵巢功能下降和机体对外界有害因素的抵抗力降低，加上宫颈因多次分娩而受损亦容易被HPV感染［8］。本调查分析结果表明，河源地区妇女感染高峰在30~39岁，此年龄组的阳性率最高（26.56%），20~29岁和40~49岁年龄组，阳性率分别为20.38%和16.85%，明显下降，整个感染分布情况呈正态分布，说明性活跃妇女的HPV感染率较高。这与上述文献关于性活跃的年轻妇女HPV感染机会增多，其流行状态随年龄的增长而逐渐降低的报道较为一致。
3.3HPV感染与宫颈癌的关系
研究表明，HPV感染可能诱导多种肿瘤的发生，例如结膜鳞状细胞癌、头颈部肿瘤、食管癌、乳腺癌、子宫颈癌、前列腺癌、阴茎癌等［9］，宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，居女性恶性肿瘤的第二位。在全世界范围内，宫颈癌的发病率和病死率均较高，我国每年宫颈癌的新发病例超过13万，占全球的1/4~1/3，给家庭和社会造成巨大的经济和社会负担［10］。高危型HPV与宫颈癌密切相关，其中HPV16是宫颈癌中最常见亚型，其次是HPV52、58、53和HPV18。低危型HPV11、CP8304、6亚型极少出现在宫颈恶性病变中，主要引起外生殖器尖锐湿疣和宫颈良性病变。在本调查中，1 037例检测样本有227例HPV阳性，感染率为21.89%（227/1 037），其中高危型占85.67%。病变宫颈组织中，高危型HPV的检出率随宫颈病变程度递增进一步证实了高危型HPV是宫颈癌的重要诱因，这提示我们需密切关注河源地区妇女HPV的感染情况，定期对高危人群进行随访；建立包括健康体检、生活指导、行为干预、定期举办健康讲座等健康管理模式［11］；对普通人群做好HPV感染相关知识的宣传及性卫生教育，这对降低人群HPV感染率，减少宫颈癌的发生有积极意义。
3.4HPV的多重感染
河源地区妇女感染HPV，主要为单一基因型感染，占感染人数的75.33%（171/227），其余为混合感染56例，占感染人数的24.67%，感染基因型最多的为六重感染0.44%（1/227）；混合感染的类型以双重感染为主，14.98%（34/227），且主要是高危亚型间的混合感染，占69.64%（39/56）；其余为低危亚型和高危亚型的混合感染，占30.36%（17/56）；未发现仅有低危亚型间的混合感染。HPV52是混合感染中最常见的感染亚型，占41.07%（23/56）；其次是HPV16，占30.36%（17/56）。HPV感染是性传播疾病之一，患者和（或）对方性伙伴越多，多重感染的概率可能就越大。大多数人感染后会自行消退，这与个人的年龄和免疫功能有关，只有持续的高危型的HPV 感染才会发生癌前病变或宫颈癌［12］。自身清除病毒，单一感染者可能比多重感染者容易，其中HPV16是最难清除掉的基因型。妇女感染高危型HPV后，在随后的几年中发展成CINⅢ级病变的风险比未感染者大得多。目前国外研究用来预防宫颈癌的HPV疫苗，主要针对HPV16和HPV18的两价疫苗，但是对混合感染中除HPV16和HPV18外其他高危亚型的感染没有预防能力，因而不完全能够达到理想的预防效果。因此了解各地区的HPV感染类型及各自比例，对研究制定针对性的基因疫苗也有积极意义。
综上所述，河源地区妇女HPV感染率较高，高危型组感染率高于低危型型组，以单一感染为主，感染的基因型别主要以高危型HPV52、16、58、53、18和低危型HPV11、CP8304、6多见。HPV基因分型检测对宫颈癌的预防、早发现和早诊疗具有重要临床意义。
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