张旭，钟鸿干，孙杨，裴明海，王辉
（三亚市海洋与渔业监测中心，海南 三亚 572000）
摘要：小球藻（ChLoreLLa pyrenoidosa）作为渔业生产常用藻，因其强大的光合作用和易于消化的特性，在鱼、虾、蟹、贝的养殖过程中起着很好的肥水和调水的作用。本研究通过实验证明，在飞机草（Eupatorium odoratum）浸提液作用下，小球藻的增殖速度明显高于未做添加组。可满足小球藻大量、快速增殖的生产需求。
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关键词 ：小球藻；飞机草；快速增殖
小球藻为绿藻门小球藻属单细胞绿藻，广泛分布于自然界，以淡水水域种类多，生物量大。小球藻的光合作用是其他植物的10倍以上，在鱼虾蟹贝的养殖过程中起着很好的肥水和调水的作用。本研究发现，在飞机草浸提液的作用下，小球藻的增殖效果十分显著，可满足小球藻大量、快速增殖的生产需求。
1材料与方法
1.1实验材料
实验用MA培养基试剂均为分析纯。Bicine 购于Sigma （St. Louis，MO，USA）。小球藻由海南大学水产养殖学科研究生联合培养基地——中国水产科学研究院东海水产研究所海南琼海研究中心提供，培养基选用MA培养基，pH 8.60±0?02，配方如表1。恒温培养箱中培养，温度（25±1） ℃，光照5 000 lx。飞机草粉末是由自然环境下随处可见的野生飞机草 （茎和叶） 采摘后自然干燥，粉碎机粉碎后制得。
1.2实验方法
1.2.1飞机草活性物质的浸提准确称取飞机草粉末 20.0 g，CaO 3.0 g于500 mL烧杯中混匀，加蒸馏水200 mL浸没搅匀，用锡纸封口于室温下浸提24 h后，经0.45 μm中速定性滤纸过滤，滤液即为飞机草浸提液，备用。
1.2.2飞机草浸提液对小球藻的增殖影响于12支10 mL培养管中加入5 mL MA培养基，121 ℃灭菌，冷却后接入对数期藻液 1 mL，按梯度100 μL、200 μL、400 μL接入飞机草浸提液，对照组无添加。各条件组均做3联处理，于恒温培养箱中培养，每天摇匀一次。测定并记录 1 mL对数期藻液的叶绿素 a 浓度。培养3 d后，再次测量各培养组的叶绿素 a 浓度。
1.3数据的处理
1.3.1显微计数取对数期小球藻0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL和4 mL，3 联处理，稀释相应倍数后各取100 μL 滴于浮游植物计数框后盖好盖玻片，进行显微镜检。根据显微镜检视野法进行细胞计数，计算公式如下：
式中：Cs ——计数框面积，（mm）；
Fs —— 单个视野的面积，（mm）；
Fn ——视野数；
V ——藻液体积，（mL）；
v ——计数框容积，（mL）；
Pn ——Fn个视野中所计数到的细胞个数。
1.3.2统计分析所得数据用Microsoft ExceL 2003和spss 17.0统计软件进行分析。采用t检验进行差异显著性检验，显著差异水平为P＜0.05。
2结果与分析
通过3 d培养后发现，添加100 μL、200 μL和400 μL飞机草浸提液后的培养组，小球藻的细胞个数均明显高于对照组，可见，飞机草含有促进小球藻增殖的活性物质，对小球藻的增殖具有促进作用。在实验用剂量范围内，添加200 μL飞机草浸提液的培养组在培养了3 d后细胞个数最多，如图1。
3结论
通过实验研究发现，在MA培养基中添加飞机草浸提液培养小球藻，小球藻的增殖速度明显快于未做添加的对照组。可见，飞机草浸提液中含有刺激小球藻快速增殖分裂的活性物质。
在实验用飞机草浸提液剂量范围下，小球藻的增殖效果均明显高于对照组，其中200 μL剂量下的增殖效果明显强于100 μL和400 μL组。可见，飞机草浸提液中刺激小球藻增殖分裂的活性物质与使用剂量之间并不是简单的剂量越大刺激越强的关系。该活性物质的刺激作用与使用剂量、藻体浓度之间存在一定的函数关系。
实验所用飞机草浸提液剂量范围内，小球藻细胞个数与浸提液剂量的最强配比是58.5万个/mL对应200 μL飞机草浸提液。
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参考文献：
[1] Ding WX， Shen HM， Ong CN. Microcystic cyanobact eria extract induces cytoskeL eton disruption and intraceLLuLar gLutathione aLterat ion in hepatocytes [J]. Environ HeaLth Persp.2000， 108： 605-609
The research on rapid proliferation of ChLoreLLa pyrenoidosa
ZHANG xu， ZHONG honggan， SUN yang，PEI Minghai，WANG Hui
（Sanya city ocean and fishery monitoring center， Sanya 57200 Hainan， China）
Abstract：ChLoreLLa pyrenoidosais one kind of common algae. Because of the strong photosynthesis and the characteristic of easy to digest， can fertilize and transfer the water in the breeding process， it plays a very important role in the cultivations of the fish， the shrimp， the crabs and the shellfish. The result shows that ChLoreLLa pyrenoidosa can proliferate more rapid with the extracted liquid from Eupatorium odoratum than without it. The discovery could meet the need of ChLoreLLa pyrenoidosa rapid proliferation.
Key words：ChLoreLLa pyrenoidosa； Eupatorium odoratum； rapid proliferation
（收稿日期：2014-05-28）