吕国荣?1，詹文辉?2
（1.福建省浦城县动物卫生监督所 353400；2.福建省南平市动物疫病预防控制中心 353000）
根据禽流感病毒致病性和毒力的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感。高致病性禽流感其发病率和死亡率都很高。做好预防和控制很重要，现将我县2014年高致病性禽流感免疫监测情况报告如下。
1 材料准备
仪器：天平、普通离心机、微型振荡器、微量移液器、滴头、96孔V型血凝反应板。试剂：禽流感病毒H5亚型标准抗原及标准阳性血清（哈尔滨兽医研究所）。
2 操作方法
2.1 血凝（HA）试验
①采用微量血凝试验，在微量凝集板上，从第1孔至第12孔，用加样器每孔加入PBS?0.025mL，第1孔加抗原（病毒悬液）?0.025mL，混匀。从第1孔起，依次作倍比稀释至第11孔，最后弃掉?0.025mL。每孔再加入0.025mLPBS。② 每孔加入1%鸡红细胞悬液0.025mL（将红细胞悬液充分摇匀后加入），第12孔设不加病毒的红细胞对照孔，立即在微量振荡器上摇匀，置室温（20~25℃）40分钟，观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。③结果判定：将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
2.2 血凝抑制（HI）试验
①根据2.1试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1∶256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1∶64。②在微量反应板的1-11孔加入0.025 mLPBS，第12孔加入?0.05mLPBS。③吸取0.025 mL待检血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025mL于第2孔， 依次倍比稀释至10孔， 从第10孔吸取0.025mL弃掉。④1-11孔均加入4HAU 混匀的病毒抗原液0.025mL，室温（约20℃）静置至少30min。⑤每孔加入0.025mL（V/V）的 1%红细胞悬液混匀， 室温静置约40min。对照红细胞呈明显钮扣状沉于孔底。
3 结果判定
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于3 log2判定HI试验阴性；HI价等于4 log2为可颖，需重复试验；HI价大于或等于5log2为阳性。
4 监测结果
全县监测结果为：种鸡场100份血清，100份抗体阳性，免疫抗体合格率达100%；商品鸡场253份血清，244份抗体阳性，免疫抗体合格率达96.44%；散养鸡190份血清，185份抗体阳性，免疫抗体合格率达97.37%。商品鸭场180份血清，168份抗体阳性，免疫抗体合格率达93.33%；散养鸭95份血清，92份抗体阳性，免疫抗体合格率达96.84%。
5 结果分析
监测结果表明，浦城县高致病性禽流感免疫抗体合格率较高，达到农业部规定的免疫抗体合格率全年保持在70%以上的要求。
重视培训。我县加强了村级动物防疫员培训工作。培训内容包括动物防疫相关法律法规及规章制度、疫苗基础知识、免疫接种及免疫反应的预防与处理、消毒基础知识、样品的采集、保存与运输方法、病死动物无害化处理方法等。开展村级动物防疫员集中培训，主要是为了提高村级动物防疫人员的理论水平、操作技能和服务水平。
加强免疫。我县各乡镇成立免疫专业队，由乡镇领导，村干部、乡镇挂村人员、村动物防疫员及其他有关人员等组成，业务干部进村入户指导。逐村逐户开展集中免疫，坚决杜绝“三漏免”和“三不免”现象。坚持集中免疫和每月补免日制度。
加大督查。在春秋季动物集中免疫期间，我县组织督查组开展检查指导，按照“领导到位、责任到人，冷链到底、疫苗到员，档案到户，标识到畜”的要求，对各乡镇免疫情况开展专项检查，重点检查免疫工作进展、免疫密度、人员到位等情况，结合省市下达的绩效管理考核内容，及时纠正免疫中存在的不足问题，促进免疫进度，督促落实各项防控措施，确保动物疫病防控工作取得良好成效。