许岩，李勃，丁勇，刘中，周军，郝佳
（大连市海洋与渔业环境监测中心，辽宁 大连 116023）
摘要：不确定度是一个合理表征测量结果分散性的参数，具有广泛的应用性和实用性。不确定度的评估对实际检测工作的质量控制具有重要意义。本文研究了荧光分光光度计法测定贝类产品石油烃含量过程中所产生的不确定度。分别考虑了油标准储备液本身、储备液稀释过程、标准曲线拟合、样品的称量、皂化过程、样品的溶解及重复测定过程等各方面因素。评估了各项因子的不确定度、合成不确定度以及扩展不确定度。结果表明，在现场特定情况下，当贝类产品中石油烃的浓度为9.08 mg/kg时，其相对合成不确定度为11?1%，扩展不确定度为2.02 mg/kg（k=2）。贝类产品石油烃测定的不确定度主要由样品的皂化反应处理过程中的损失所致。因此减少皂化反应过程中的损失，提高皂化样品的回收率，可以有效的减少测量过程中的不确定度，从而提高检测结果的正确度。
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关键词 ：贝类；石油烃；荧光分光光度法；测量不确定度
本文对荧光分光光度计法测定贝类产品中石油烃含量的各个影响因子进行了分析，对其不确定度进行了评估，用以反映其测量的准确度和置信度，从而保证检验结果的有效性和合理性。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
荧光分光光度计（PE LS45）；旋转蒸发仪（布琪）；经脱芳处理后透光率大于90%的石油醚（分析纯，沸点范围60～90 ℃）；6 mol/L氢氧化钠（优级纯）溶液；无水乙醇（重蒸后使用）；二氯甲烷（重蒸后使用）；氯化钠（优级纯）饱和溶液。
1.2方法
样品采集、制备及分析测试过程均严格按照海洋环境监测规范GB 17378.6-2007/13执行。准确称取2～5 g（±0.000 1 g）贝类组织样品于100 mL皂化瓶中进行皂化反应后，用经重蒸处理的二氯甲烷进行萃取，将有机相收集于旋转蒸发瓶中经旋转蒸发至二氯甲烷萃取液剩余0.5 mL，取下旋转蒸发瓶用氮气将残留二氯甲烷萃取液吹干，准确加入10.0 mL脱芳石油醚溶解残留物，制得样品消化液。使用荧光分光光度计通过测定已知浓度的标准溶液系列，得到浓度和响应值相关的一次线性方程，利用得到的线性方程，通过测定样品的响应值计算得样品的浓度[1]。
1.3建立数学模型
试样中石油烃含量的计算公式：Woil=mV/M
式中：Woil——生物体中石油烃的含量（质量分数，mg/kg）
m——从工作曲线上查得的石油烃的含量（mg/L）
V——萃取剂的体积（20 mL）
M——样品的称取量（g）
1.4不确定度的主要来源
——油标准储备液（GBW（E）080913）引入的不确定度
——稀释过程中引入的不确定度
——拟合标准曲线过程中引入的不确定度
——称量样品引入的不确定度
——样品皂化回收率产生的不确定度
——加入溶解液过程中引起的不确定度
——结果的重复性带来的不确定度
2不确定度的评估
2.1标准曲线配制过程引入的不确定度
2.2拟合标准曲线过程中引入的不确定度
采用6个浓度水平的油标准系列，每个浓度点用荧光分光光度法分别测定三次，曲线各浓度点荧光强度值及样品平行测定三次的浓度值结果分别见表1和表2。
根据CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》，标准曲线拟合带来的标准不确定度计算公式:
b为标准曲线斜率b=5.065；
a为标准曲线的截距a=-0.137 4；
P为待测样品的重复次数P=3；
n为回归曲线的点数n=18；
c为待测样品浓度的平均值c=9.08 mg/kg；
c0为回归曲线上各点浓度的平均值c0=4?33 mg/L ；
A0i为各标准液实际荧光强度值。
带入数值计算得曲线拟合所引入的合成不确定度：u(拟合)=0.103 mg/L。由标准曲线拟合所带来的相对合成不确定度为：uref(拟合)=u(拟合)/ c0=2.38%。
2.3测定液制备过程中引入的不确定度
2.3.2样品皂化回收率产生的不确定度本次测试的加标回收率为79%~84%，则由于样品回收率引入的不确定度为（取JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》中的近似公式计算）[2]：
2.4结果的重复性带来的不确定度
2.5贝类产品石油烃测定中的相对合成不确定度
2.6扩展不确定度
取置信概率95%，扩展因子为k=2。其扩展不确定度为:1.01×2=2.02 mg/kg
3结果
贝类样品中石油烃的含量为：(9.08±2.02) mg/kg(置信概率95%，扩展因子为2)。
4讨论
采用分子荧光法测定贝类产品中石油烃的含量，测定结果的扩展不确定度为2.02 mg/kg，测定结果表示为(9.08±2.02) mg/kg，k=2。由于样品皂化不完全，造成较大的损失,使其成为贝类样品石油烃含量测试过程中不确定度的主要来源。因此减少皂化反应过程中的损失，提高皂化样品的回收率，可以有效的减少测量过程中的不确定度，从而提高检测结果的正确度。
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参考文献：
[1] GB 17378.6-2007，海洋监测规范 第6部分：生物体分析[S].北京：中国标准出版社, 2007
[2] JJF 1059-1999，测量不确定度评定与表示[S].北京：中国计量出版社，1999
[3] JJG 196 -2006，常用玻璃量器检定规程[S].北京：国家质量监督检验检疫总局，2006
[4] 陈妙瑞，闫鹤，石磊. 石墨炉原子吸收法测定肉制品中镉的过程中的不确定度评定[J].现代食品科技，2012，28（6）：709-713
[5]梁群珍，王生，肖国军，等 石墨炉原子吸收光谱法测定大米中镉含量不确定度的评定[J].微量元素与健康研究，2013，30（1）:53-58