史俊友，景年华，赵红艳
（曲靖师范学院化学化工学院，云南 曲靖 ６５５０１１）
摘要：以大叶白麻（Ｐｏａｃｙｎｕｍ ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）叶为原料，乙醇为浸提溶剂对大叶白麻多酚的提取工艺进行了探讨，首先采用单因素试验考察溶剂类型、溶剂浓度、料液比、提取时间、提取温度对大叶白麻多酚提取的影响。以此为基础，通过Ｌ９（３４）正交试验对提取工艺进一步优化。结果表明，各因素对多酚提取效率的影响大小为溶剂浓度＞水浴时间＞料液比＞水浴温度。大叶白麻多酚的最佳提取工艺以乙醇为提取溶剂，浸提温度为８０ ℃，乙醇体积分数为４０％，提取时间３０ ｍｉｎ，料液比为１∶２０（ｇ∶ｍＬ），该条件下大叶白麻多酚含量为１０．２１ ｍｇ／ｇ。
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关键词 ：大叶白麻（Ｐｏａｃｙｎｕｍ ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）；多酚；乙醇浸提法；正交试验
中图分类号：Ｓ５６３．３；Ｒ２８４．２ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）16－4016-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.047
收稿日期：２０１５－０５－１４
基金项目：云南省教育厅科学研究基金项目（２０１４Ｙ４３８）；曲靖师范学院重点资助项目（２０１１ＺＤＺＣ１）；曲靖师范学院校级精品课程项目（ＪＰＫＣ２０１３００３；ＪＰＫＣ２０１４００４）
作者简介：史俊友（１９８１－），男，山东济南人，讲师，博士，主要从事天然产物有效成分的分离研究，（电话）１８９０８７４１２４６（电子信箱）ｓｈｉｊｕｎｙｏｕ１２３＠１２６．ｃｏｍ。
大叶白麻（Ｐｏａｃｙｎｕｍ ｈｅｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）俗称“大花罗布麻”，又称野麻，为夹竹桃科白麻属多年生草本植物［１，２］，主要分布于青海、新疆和甘肃等省区的沙漠边缘、盐碱荒地、河流沿岸冲积平原地带［３］。作为新疆罗布麻叶浸膏及其制剂的主要原料，大叶白麻被证明具有延缓衰老、降压、降脂、抗感冒、镇静安神、保护脑神经等功效［４－８］，目前常被用来制作降压药和降压保健茶。成分研究表明，大叶白麻叶中含有酚类、鞣质、多糖、黄酮、强心苷、内酯、香豆素、甾体等物质［９］。
植物多酚是广泛存在于植物体内的多酚类物质，具有抗氧化、抗衰老、抗菌消炎、抗癌、抗病毒、减少心血管疾病等功效，目前已被广泛用于医学、食品、制革和日用化工等相关领域［１０，１１］。但到目前为止，大叶白麻中多酚提取还未有系统报道。本试验选取乙醇为提取溶剂，对大叶白麻中总多酚进行浸提及含量测定，以期为大叶白麻的进一步开发利用提供参考依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
大叶白麻叶采自格尔木市；焦性没食子酸标准品，上海抚生生物技术有限公司；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、丙酮、乙酸乙酯、七水硫酸亚铁、四水合酒石酸钾钠、无水乙醇均为分析纯。
ＳＨＺ－Ｄ（Ⅲ）型循环真空泵，郑州博科仪器设备有限公司；紫外－可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司；ＭＳＥ３２３Ｓ型电子天平，德国赛多利斯公司；ＦＷ１７７型中草药粉碎机，天津泰斯特仪器有限公司；ＤＺＫＷ型恒温水浴锅、１０１－１ＥＳ型干燥箱，北京市永光明医疗仪器有限公司。
１．２ 方法
１．２．１ 样品预处理 将采摘的大叶白麻叶用清水洗净后阴干，均匀摊开后放入７０ ℃的烘箱中烘烤４ ｈ，取出后将烘干的大叶白麻叶放入中药高速粉碎机中粉碎，粉碎后过２０目筛备用。
１．２．2 标准曲线绘制 参照贤景春等［１２］、牛春燕等［１３］的试验方法，以焦性没食子酸为标准品，采用可见分光光度法测定大叶白麻叶中多酚的含量。取０．２５ ｍｇ/ｍＬ焦性没食子酸标准液０．５、１.0、２.0、３.0、４.0、５.0 ｍＬ分别置于２５ ｍＬ的容量瓶中，加去离子水５ ｍＬ，酒石酸铁溶液５ ｍＬ，用ｐＨ ７．５的磷酸盐缓冲溶液定容；振荡混匀静置后，在波长为５４０ ｎｍ下测其吸光度。然后以标准液浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标，得标准曲线：Ａ＝０．１０１ ２６＋１５．７４４ ２Ｃ，Ｒ２＝０．９９９ ２。
１．２．3 大叶白麻多酚的提取 称取一定质量的大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按比例加入设定浓度的溶剂，控制反应条件，水浴加热反应一定时间后，经循环多用真空泵抽滤，转移至５０ ｍＬ的容量瓶中，用去离子水定容，待测。
准确量取定容后的多酚溶液１ ｍＬ于１０ ｍＬ的容量瓶中，分别加入去离子水，酒石酸铁溶液１ ｍＬ，用ｐＨ ７．５的磷酸盐缓冲溶液定容；振荡混匀静置后，在波长为５４０ ｎｍ下测其吸光度，然后根据标准曲线计算多酚的含量。
１．２．４ 单因素试验
１）提取溶剂。准确称取４.0 ｇ大叶白麻叶粉末，置于冷凝回流装置中，分别加入等体积的去离子水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，水浴加热反应５０ ｍｉｎ后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。
２）乙醇体积分数。称取４.0 ｇ大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按料液比１∶１０（ｇ∶ｍＬ，下同）分别加入６０％、７０％、８０％、９０％的乙醇溶液，水浴加热反应５０ ｍｉｎ后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。
３）料液比。准确称取４.0 ｇ大叶白麻叶粉末，置于冷凝回流装置中，分别按料液比１∶５、１∶１０、１∶１５、１∶２０、１∶２５加入５０％乙醇溶液，水浴加热反应５０ ｍｉｎ后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。
４）水浴温度。称取４.0 ｇ大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按料液比１∶１０加入，５０％乙醇溶液，分别在水浴温度３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５ ℃下反应５０ ｍｉｎ后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。
５）提取时间。称取４.0 ｇ大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按料液比１∶１０加入５０％乙醇溶液在水浴温度８０ ℃分别反应１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０ ｍｉｎ，然后趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。
１．２．５ 正交试验设计 在单因素试验的基础上，选取提取温度（Ａ）、乙醇体积分数（Ｂ）、水浴时间（Ｃ）、料液比（Ｄ）为主要考察因素，设计了４因素３水平正交试验，正交试验因素与水平见表１。
２ 结果与分析
２．１ 单因素试验结果
２．１．１ 提取溶剂对大叶白麻多酚含量的影响 试验选取去离子水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等４种较为常用的溶剂对多酚进行提取，并对它们的提取效果进行比较（图１）。由图１可知，在４种溶剂中丙酮提取多酚含量较低，去离子水、乙醇和乙酸乙酯的提取含量较高，效果接近。但考虑到水提物杂质较多，后续较难处理，乙酸乙酯存在一定毒性，后续试验选取生活中常用的乙醇作为提取溶剂。
２．１．２ 乙醇体积分数对大叶白麻多酚含量的影响 因多酚极性一般较大，选取体积分数较低的乙醇进行提取，并对３０％、４０％、５０％、６０％乙醇的提取情况进行考察（图２）。由图２可知，随着乙醇体积分数的增加，多酚的浸出量先增加后减少，当乙醇体积分数为５０％时多酚的提取效果最好，故选择５０％乙醇作为考察对象。
２．１．３ 料液比对大叶白麻多酚含量的影响 由图３可知，随着溶剂的增加，多酚的浸出量先增加后减少，大叶白麻质量与乙醇溶剂体积之比为１∶２０时，多酚的提取量达到最高。故后续试验中选择料液比为１∶２０作为考察对象。
２．１．４ 水浴温度对大叶白麻多酚含量的影响 由图４可知，随着提取温度的升高，大叶白麻多酚的含量呈上升趋势，当温度为８０ ℃时，大叶白麻多酚的含量达到最高，其主要原因为高温提高了分子扩散速度，有利于多酚从细胞壁中溶出。当温度继续升高时含量开始下降，这可能是由于大叶白麻多酚热稳定性较差，易被氧化分解所致。故选择８０ ℃的乙醇溶液作为考察对象。
２．１．５ 提取时间对大叶白麻多酚含量的影响 由图５可知，随着提取时间的增加，多酚的浸出量先增加后减少，当水浴时间为２５ ｍｉｎ时，多酚的提取效果最好，所以选择水浴时间为２５ ｍｉｎ作为考察对象。
２．２ 正交试验结果
参考单因素试验的结果，以料液比、提取时间、溶剂体积分数和提取温度等４个因素进行正交试验设计，优化乙醇提取大叶白麻多酚的最佳工艺。正交试验结果见表２。分析表２中的极差Ｒ值可知，４个因素影响顺序为Ｂ＞Ｃ＞Ｄ＞Ａ，即溶剂体积分数＞水浴时间＞料液比＞水浴温度，最佳组合为Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ３。即最佳提取工艺条件为浸提温度８０ ℃，溶剂体积分数４０％，水浴时间３０ ｍｉｎ，料液比１∶２０。为了验证正交试验结果，在此条件下进行了３次验证试验，多酚的平均提取率为１０．２１ ｍｇ／ｇ，表明该方法可行。
３ 小结
通过单因素试验，确定采用乙醇作为提取溶剂对大叶白麻多酚进行浸提，在进一步正交试验的基础上，确定了大叶白麻中多酚的最佳提取工艺条件： 浸提温度为８０ ℃，乙醇体积分数为４０％，水浴时间３０ ｍｉｎ，料液比为１∶２０，该条件下大叶白麻多酚的含量可达１０．２１ ｍｇ／ｇ。
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