佟桂芝，宋 斌，黄 红，丁昕颖
（黑龙江省畜牧研究所 161005）
日本和牛是当今世界公认的优秀肉牛品种之一。其肉大理石花纹明显，由于其肉质细嫩多汁，肌肉脂肪中饱和脂肪酸含量很低，风味独特，肉用价值极高，在日本被视为“国宝”，全球市场售价极其昂贵。快速扩繁纯种和牛的繁育技术主要包括以下几个方面。
1 同期发情与人工授精
人工授精技术自20世纪40年代问世以来，经过几十年的不断发展和完善，特别是精液冷冻保存技术的成熟，使人工授精技术成为肉牛育种中最重要的生物技术。该技术可以使优秀的种公牛得到更好的利用，精液冷冻保存技术使得优秀种公牛的使用范围不再受时间和地区的限制。这就扩大了优秀种公牛在肉牛遗传改良中的作用。精液冷冻保存技术还减少了种公牛的饲养量，提高了公牛的选择强度，加快了群体的遗传进展，更经济可靠地实现肉牛品种资源保护。
使和牛母牛在同一时期内发情并排卵的技术，称为同期发情。同期发情实质是诱导母牛在同一时期发情排卵的方法。定时输精，是在近年发展起来的一种能使多头母牛在短时间内集中发情和集中进行人工授精的技术。采用同期发情技术，对提高母牛繁殖率和养牛生产经济效益具有重要意义。采取同期发情技术，减少空怀时间，确保和牛母牛1年1产，既节省饲料成本，又增加产犊收入；同期发情、配种、产犊，有利于犊牛的饲养管理和出售，符合养殖业规模化、集约化的发展趋势；选择配种时间，在最佳季节产犊，如避开寒冬、炎热夏天以及枯草季节，既提高犊牛的成活率又能充分利用牧草资源，降低饲养成本；使不发情母牛发情配种，从而提高繁殖率；便于人工授精技术的推广和普及，提高冷冻精液配种工作效率；容易操作，一般授精员经过培训后都能够掌握。因为操作简单和成本低，同期发情和人工输精是使用最广泛的辅助生殖技术。
2 超数排卵与胚胎移植技术
牛是单胎动物，其繁殖力在很大程度上限制了生产力的发挥。随着动物繁殖技术的发展，超数排卵从某种程度上解决了这一问题，即应用外源性促性腺激素诱发母牛卵巢发育并排出具有受精能力的卵子的方法，称为超数排卵，简称“超排”。超数排卵是进行胚胎移植时，对供体母牛必须进行的程序，目的在于得到更多的胚胎。胚胎移植是对超数排卵处理的母牛（供体），从其输卵管或子宫内取出许多胚胎移植到另一群母牛（受体）的输卵管或子宫内，以达到产生供体后代的目的。这是一种使少数优秀供体母牛产生较多的具有优良遗传性状的胚胎，使多数受体母牛妊娠、分娩而达到加快优秀供体母牛品种繁殖的一种先进繁殖技术。主要包括下列环节：①选择生殖机能正常、具有优良遗传特性的母牛作为供体，在发情周期的中后期，注射促性腺激素（有时需再注射前列腺素），激发卵巢使之超数排卵。然后非手术方法（将专门的采卵管插入子宫），用生理培养液将胚胎由子宫角冲出。②对采集的胚胎进行鉴定，选出正常者用于移植。也可以进行培养，或在零下196℃的液态氮中长期保存，待需要时再行移植。③在受体发情后的相应时间（一般和供体发情时间相差不能超过1天），按上述采集胚胎的相同途径，利用移植管将胚胎移植到受体子宫的一定部位内。为此，在供体发情时须选择同时自然发情的母畜留作受体，或在对供体进行激素处理诱发超数排卵的同时，选择若干适用的受体也注射激素，使之与供体同时发情，但不配种，留待移植之用。如使用冷冻保存的胚胎，应先选出受体母畜，待其自然发情后再根据胚胎的发育日龄进行移植。由于牛可以实现非手术采胚和移植，操作过程较易完成。通过MOET技术可以使优秀的和牛母牛能获得更多的后代。
3 幼畜超排、活体采卵、体外受精
幼畜超排是根据性成熟前幼畜（1～2月龄）卵巢对生殖激素敏感，卵泡发育很少发生闭锁的特殊生理特点而发明的一项高效率生产卵母细胞的新技术。诱导幼畜超数排卵技术可以充分挖掘和利用优良母畜的早期繁殖潜力，大大加快家畜育种及品种改良进程，同时也将解决种畜胚胎移植商业化所需胚胎来源匮乏及胚胎生产成本昂贵的问题，将大大促进胚胎生产的商业化应用，前景十分广阔。但是，这种幼畜超排的卵，在体外受精后，发育到囊胚期的潜能比成年动物超排的卵发育潜能有所降低。
牛卵母细胞的活体采集技术是二十世纪90年代发展起来的一项新型获得优秀种母牛卵母细胞技术，是继牛体外受精、胚胎移植技术之后研究并推出的一项胚胎工程技术。该技术与体外胚胎生产(IVP)技术相结合，可以反复地从性成熟前母犊牛体内采集卵母细胞，结合体外受精(IVF)技术生产大量系谱明确的胚胎，使其繁殖后代，克服了超数排卵和屠宰取卵技术应用中需要等待母牛成熟的缺点，从而大大缩短了世代间隔，加快了育种进程。这种技术始于二十世纪80年代初期，至90年代中期实现生产性应用。目前在一些发达国家，如日本、加拿大、美国、荷兰均实现商业化生产。采用活体采卵(LOPU) -卵母细胞体外受精(IVF) -胚胎移植(ET)配套技术。活体采卵的方法主要有盲采法、内窥镜法和B型超声波导引法三种。
体外受精技术也称胚胎的体外生产技术(IVP)，包括以下几个步骤：卵母细胞采集、卵母细胞的体外成熟、精液预处理、体外受精、胚胎体外培养、和胚胎移植。迄今为止体外受精在各个主要技术环节上的效率还不高，因此总体技术水平尚未达到应用水平的要求。
4 胚胎分割
胚胎分割是通过对胚胎进行显微操作，人工制造和牛的同卵双生或同卵多生的技术，是扩大胚胎来源的一条重要途径，其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性。母牛怀双胎是一公一母时，会发生母犊的异性孪生不孕。而移植通过胚胎的分割技术生产的双半胚胎，来使母牛怀双胎，就可以避免异性双胎现象，从而避免出生的母犊先天性不孕，失去母牛的利用价值现象。
5 性别控制
为了达到人为控制和牛群性比例，人为对胚胎性别鉴定进行了技术研究。对肉牛进行性别控制的实用技术目前有两种，一种是利用性控精液（分离的X、Y精子）通过人工授精生产体内胚胎或通过体外受精生产体外胚胎；另一种是通过控制母牛的生殖道环境来控制胚胎的性别。而早期对胚胎进行性鉴别方法有两种，即通过PCR法或LAMP法对体内外生产胚胎进行性鉴别，然后根据需要选择移植方案，生产已知性别胚胎。
在肉牛良种扩繁方面，人工授精、胚胎移植等生物技术仍然发挥着重要作用；同期发情及定时输精经技术在规模化牛场的应用加快了纯种扩繁的步伐；胚胎分割、一胎双犊研究，犊牛超排、犊牛的性别控制给和牛的纯种扩繁提供无数的可能，希望在不远的将来，该项技术达到应用推广阶段。