姜晓龙１，２，金磊磊２，喻镇东２，陈辉辉２，邵 荣１，许 伟１，陈集双２
（１．盐城工学院化学与生物工程学院， 江苏 盐城 ２２４０００；２．南京工业大学生物与制药工程学院，南京 ２１００００）
摘要：通过对蓖麻（Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ）发病部位进行真菌分离、纯化、鉴定、致病性测定，确定侵染蓖麻的病原菌为葡萄座腔菌（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ），并采用菌丝生长速率法测定５０％多菌灵ＷＰ、７０％甲基托布津ＷＰ、７５％百菌清ＷＰ、９９％恶霉灵ＷＰ、８０％代森锰锌ＷＰ ５种杀菌剂对菌丝生长的毒力。结果表明，毒力最强的杀菌剂是５０％多菌灵，对病菌Ｂ． ｄｏｔｈｉｄｅａ的ＥＣ５０为０．１７３ ５ μｇ／ｍＬ，抑菌效果明显优于其他４种杀菌剂。
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关键词 ：蓖麻（Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ）；葡萄座腔菌（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ）；杀菌剂；毒力测定
中图分类号：Ｓ４８２．２ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）16－3942-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.028
收稿日期：２０１５－０５－２８
作者简介：姜晓龙（１９８９－），男，江苏常州人，在读硕士研究生，研究方向为植物病毒和真菌病毒，（电话）１８５１６０９９５６０（电子信箱）ｊｉａｎｇ７７３５０７１６６＠１２６．ｃｏｍ；通信作者，许 伟（１９７６－），女，副教授，博士，主要从事生物资源开发及酶工程研究，（电子信箱）ｙｃｉｔｘｕｗｅｉ＠ｙｃｉｔ．ｅｄｕ．ｃｎ。
蓖麻（Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ）属于大戟科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）蓖麻属，一年生或多年生草本植物，俗称草麻、大麻子、红麻等，是世界十大油料作物之一［１］。原产于东非埃塞俄比亚，先后传入亚洲、欧洲和美洲，以印度、中国、巴西最多［２］。蓖麻植株高大，茎干粗壮，根系强大，入土深，耐旱性强。蓖麻适应性广，具有耐瘠薄、耐盐碱能力，可在丘陵、山坡、盐碱等地种植［３］。蓖麻具有很高的经济价值，蓖麻叶宽大，营养丰富，可养蚕；秸秆可以造纸；油渣饼脱毒后可作饲料，还可以作为生物防虫剂；最重要的是蓖麻子，经加工后可产蓖麻油，蓖麻油是重要的工业原料［４－６］。
葡萄座腔菌（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ）是一种常见的植物病原菌，为害很多经济树种和植物，常见的有梨、桃、栗子、桉树等［７］。杀菌剂已广泛用于防治葡萄座腔菌等真菌，市场上普遍使用较多的是甲基托布津、多菌灵和百菌清等。为了能够有效地控制葡萄座腔菌在蓖麻上产生的危害，本研究使用市面上常用的５种杀菌剂对上述病原菌进行室内毒力测定，以期为葡萄座腔菌的大田防治奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试菌株为葡萄座腔菌，２０１３年从苏东发病蓖麻上分离得到并通过纯化和鉴定，保存于４ ℃冰箱中。
供试药剂为多菌灵（江苏蓝丰生物化工股份有限公司，５０％可湿性粉剂），甲基托布津（江苏龙灯化学有限公司，７０％可湿性粉剂），百菌清（陕西亿农高科药业有限公司，７５％可湿性粉剂），恶霉灵（山东省烟台鑫润精细化工有限公司，９９％可湿性粉剂），代森锰锌（山东曹达化工有限公司，８０％可湿性粉剂）。
１．２ 试验方法
１．２．１ 真菌的生物学特性 温度对菌丝生长的影响：将保存的真菌转接到ＰＤＡ培养基上，培养５ ｄ后，用直径５ ｍｍ的灭菌玻璃管取菌饼，接到新鲜的ＰＤＡ培养基上，每个培养基上放置一个菌饼，分别在５、１０、１５、２５、２８、３０、３２、３５、４０ ℃的恒温环境下培养，每个温度设置３个重复，５ ｄ后测量菌落的直径［８］。
ｐＨ对菌丝生长的影响：以去离子水（ｐＨ ７．０）配制的ＰＤＡ培养基为对照，配制不同ｐＨ的ＰＤＡ培养基，ｐＨ依次为１．０、３．０、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、９．０、１０．０。同样用直径为５ ｍｍ的玻璃管接种，每个ｐＨ设置３个重复。接种后的培养基在２８ ℃恒温培养箱中培养，５ ｄ后测量菌落直径［８］。
１．２．２ 杀菌剂对菌丝生长的影响 采用生长速率法测定［９］。５种药剂按倍稀释法进行稀释，用无菌水分别制成浓度为１ ０００ μｇ／ｍＬ的母液，加入到ＰＤＡ液体培养基中，使培养基浓度分别为０．０１、０．１、１、１０、５０ μｇ／ｍＬ，然后制成含药品的培养基平板，并加入少许链霉素，抑制细菌生长。用直径为５ ｍｍ的玻璃管取已在ＰＤＡ上活化５ ｄ的菌饼，置于培养皿中央，每个浓度设置３个重复。２８ ℃恒温培养箱中培养７２ ｈ后取出，用十字交叉法测量各培养皿中菌落的直径，取其平均值去掉菌饼的原来大小为最终菌落直径。根据不同浓度下的菌落直径、空白对照（不加药剂）的菌落直径和不同药剂浓度下菌落生长直径计算抑菌率。以药剂浓度（μｇ／ｍＬ）的对数值为自变量，抑菌率的大小为因变量，计算出药剂抑制浓度（ＥＣ５０），根据ＥＣ５０评价药效。
Ｄ（菌落增长直径）＝Ｄ１（菌落直径）－Ｄ２（菌饼直径）
Ｉ（抑菌率）＝［Ｄ０（空白菌落增长直径）－Ｄｔ（药剂处理菌落增长直径）］/Ｄ０（空白菌落增长直径）×１００％
２ 结果与分析
２．１ 真菌的生物学特征
从表１可以看出，葡萄座腔菌在１０～３５ ℃均能够生长，但是在２５～３０ ℃下生长状况最佳。因此该菌应该属于高温型真菌。
从表２可以看出，葡萄座腔菌在ｐＨ为５．０～７．５范围内能生长，其中ｐＨ为３．０和９．０时几乎不生长，其最适的生长ｐＨ为６．５～７．０。
２．２ 不同杀菌剂对葡萄座腔菌的ＥＣ５０
根据菌丝生长抑制率，计算出不同药剂对葡萄座腔菌的毒力回归方程、相关系数（Ｒ）以及ＥＣ５０（表３）。药剂ＥＣ５０的大小是衡量药剂毒力大小的指标，药剂ＥＣ５０越小说明该药剂的毒力越强。对葡萄座腔菌杀菌能力最强的是５０％多菌灵ＷＰ，其ＥＣ５０为０．１７３ ５ μｇ／ｍＬ，其次是７０％甲基托布津ＷＰ，ＥＣ５０为０．８５５ ３ μｇ／ｍＬ，９９％恶霉灵ＷＰ的杀菌效果最差，７５％百菌清ＷＰ和８０％代森锰锌ＷＰ杀菌效果一般。
３ 结论与讨论
葡萄座腔菌是一类世界性植物病原菌，此类真菌的特点是分布广泛、种类繁多，其寄主类型为具有经济价值的树种。在我国已引起多种果树的病害，包括主干、枝干、果实，甚至为害整株植物［１０－１２］。本研究中获得的葡萄座腔菌在实验室中的最适培养条件为温度２８ ℃、ｐＨ ７．０，因此在田间发病的时间为春夏气温偏高时。由于其还具有一定的潜伏性，可以在健康的植物中存在，一旦温度、湿度适宜，就会发病，造成危害。因此加强果树等经济植物的管理，设计合理的栽培种植方式，能够有效地预防病害的发生。
采用菌丝生长速率测定法，分别测定了甲基托布津、多菌灵、百菌清、代森锰锌和恶霉灵对从蓖麻上分离得到的葡萄座腔菌菌丝生长的毒力进行测定。结果表明，５０％多菌灵ＷＰ的杀菌效果最强，ＥＣ５０为０．１７３ ５ μｇ／ｍＬ，优于其他４种杀菌剂。多菌灵是一种苯并咪唑类杀菌剂，其作用机理是干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌作用［１３］，经本试验发现多菌灵在对该病菌的防治方面有比较好的效果。
室内毒力测定可以为葡萄座腔菌的大田防治提供一定的理论基础，进一步降低葡萄座腔菌引起的植物病害，提高化学防治的效果。但此研究仅对离体状态下的葡萄座腔菌进行了研究，田间药效还需进一步试验，才能对多菌灵有一个客观的评价。
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