张 野
铁岭市妇婴医院检验科，辽宁铁岭 112000
[摘要] 目的 探讨化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血的临床效果。方法 选取该院2013年5月—2014年5月间收治的大便标本90例作为研究对象，通过灵敏性、干扰性和特异性对化学法、单克隆抗体法和联合免疫法三种试验方法进行比较，并采用三种试验方法同时对90例大便标本进行便隐血检测。结果 联合免疫法、化学法以单克隆抗体法三种方式检测出血红蛋白的最低检出浓度分别为2、20、0.2；化学法对人和动物的血红蛋白可发生反应，联合免疫法和单克隆抗体仅和人的血红蛋白发生反应；单克隆抗体法和联合免疫法不受维生素C的干扰，当维生素C浓度超过10 mg/mL可引起化学法的阴性结果，而对联合免疫法和单克隆抗体的检测无影响。50例大便标本作为健康对照组，22例诊断为上消化道出血，记为上消化道出血组，18例诊断为下消化道肿瘤性病变，记为下消化道肿瘤性病变组，其中，化学法检出阳性例数30例、22例、18例，单克隆抗体法检出阳性例数17例、10例、15例，联合免疫法检出阳性例数25例、22例、18例。结论 联合免疫法具有较好的特异性且灵敏度比较高，抗干扰性比较强，具有良好的发展前景，在临床上有良好的应用价值。
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关键词 ] 化学法；单克隆抗体法；联合免疫法；便隐血
[中图分类号] R446.6[文献标识码] A[文章编号] 1672-5654（2014）12（c）-0183-02
临床上，便隐血主要是检测消化道出血的常规诊断指标，同时也是消化道恶性肿瘤早期诊断的重要筛查指标。随着医疗技术的快速发展，化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血具有显著的临床效果。其中，化学法以匹拉米洞法为主要检测方法，但极易受到食物和药物的影响，发假阳性反应[1]。而单克隆抗体法虽不受食物影响，但血红蛋白极易产生变性，发生假阴性反应[2]。联合免疫法则不受食物和药物影响，对便隐血的检测拥有良好的应用价值。对此，为了对比分析化学法、单克隆抗体法和联合免疫法检测便隐血的临床效果，现选取该院2013年5月—2014年5月间收治的大便标本90例作为研究对象。现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取该院收治的大便标本90例作为研究对象，通过灵敏性、干扰性和特异性对化学法、单克隆抗体法和联合免疫法三种试验方法进行比较，并采用三种试验方法同时对90例大便标本进行便隐血检测。其中，50例大便标本作为健康对照组，为临床未诊断有任何消化道疾病的常规检测标本；22例诊断为上消化道出血，记为上消化道出血组，18例诊断为下消化道肿瘤性病变，记为下消化道肿瘤性病变组；血红蛋白由正常人血液制成，以人、兔、羊、鸡等动物血液制成浓度不同的血红蛋白和维生素C。其中，前者用于灵敏性试验，后者用于干扰性试验。
1.2 试剂和方法
联合免疫法主要以华普曼生物工程有限公司提供的联合免疫法诊断试纸，按照说明书操作，结果判读参照说明书，单克隆抗体法采用华普曼生物工程有限公司提供的“速而准”便隐血单克隆抗体试剂盒，严格按照使用说明测定，5 min内读取结果。两条紫红色条带出现为阳性，一条紫红色条带出现为阴性。化学法采用珠海贝索的贝索大便隐血Ⅱ号试纸进行检测，利用纸卡作为大便检体的输送容器，其阳性反应最终呈色为紫红色。
1.3 灵敏性、特异性和干扰性试验
1.3.1 灵敏性试验取已知浓度转铁蛋白，采用蒸馏水将其稀释成500、200、100、20、2和0.25种浓度的大便悬浮液，用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法分别对其进行测定。
1.3.2 特异性试验用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法这三种方法对500的人、兔、羊、鸡血红蛋白液反应。
1.3.3 干扰性试验在含500的大便混悬液中加入4种不同浓度的维生素C，用化学法、单克隆抗体法和联合免疫法这三种方法对其进行测定。
1.4统计方法
数据均采用统计学软件spss18.0处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1三种便隐血试验灵敏性比较
联合免疫法、化学法以单克隆抗体法三种方式检测出血红蛋白的最低检出浓度分别为2、 20、 0.2。其中，“+”为阳性，“-”为阴性，见表1。
2.2三种便隐血试验特异性比较
化学法对人和动物的血红蛋白可发生反应，联合免疫法和单克隆抗体仅和人的血红蛋白发生反应。其中，“+”为阳性，“-”为阴性，见表2
2.3三种便隐血试验抗干扰性比较
单克隆抗体法和联合免疫法不受维生素C的干扰，当维生素C浓度超过10 mg/mL可引起化学法的阴性结果，而对联合免疫法和单克隆抗体的检测无影响。其中，“+”为阳性，“-”为阴性，见表3。
2.4 三种便隐血试验检测阳性率比较
50例大便标本作为健康对照组，22例诊断为上消化道出血，记为上消化道出血组，18例诊断为下消化道肿瘤性病变，记为下消化道肿瘤性病变组，化学法检出阳性例数30例、22例、18例，单克隆抗体法检出阳性例数17例、10例、15例，联合免疫法检出阳性例数25例、22例、18例。联合免疫法检测阳性率和单克隆抗体法差异有统计学意义（P<0.05），化学法和单克隆抗体差异有统计学意义（P<0.05）。
3讨论
通常情况下，单克隆抗体和联合免疫法两种检测便隐血的方法，主要为了检测人体血红蛋白抗原，而联合免疫法除了检测人体血红蛋白抗原外，还检测人转铁蛋白，具有较强的特异性和灵敏性，不会受到食物和药物等因素的影响，基于这种优势，单克隆抗体和联合免疫法两种检测方法均被广泛应用于各个医院中。但也有不足之处，当患者正常生理失血时，很容易产生假阳性结果；而单克隆抗体法极易因血红蛋白变性产生假阴性结果；化学法则很容易受到药物和食物的影响，进而产生假阳性结果。因此，化学法多以匹拉米洞组为代表，其原理是利用匹拉米洞为呈色指示剂，在酸及过氧化氢溶液作用下，与血红蛋白作用，产生紫蓝而后呈现紫红的颜色[3]。但匹拉米洞化学法跟其他化学法一样都是基于过氧化物酶活性的测定[4]，此法不具有特异性，其灵敏度比较低[5]，不易进行质量管理等问题。所以，联合免疫法具有较好的特异性且灵敏度比较高，抗干扰性比较强，具有良好的发展前景，在临床上有良好的应用价值。
从研究中可以看出，22例上消化道出血组利用联合免疫法、化学法和单克隆抗体法检测阳性率分别为100%、98.5%、75.6%，其中联合免疫法和单克隆抗体法差异有统计学意义（P<0.05）。化学法和单克隆抗体法差异有统计学意义（P<0.05），而18例下消化道出血利用联合免疫法、化学法和单克隆抗体法检测阳性率分别为100%、96.4%、82.5%，化学法和单克隆抗体法、化学法与联合免疫法之间差异有统计学意义（P<0.05）。而对照组采用联合免疫法、化学法和单克隆抗体法检测阳性率分别为52.8%、65.8%、21.4%。化学法与单克隆抗体差异有统计学意义（P<0.05）。由此可见，联合免疫法中的转铁蛋白在粪便中的稳定性高于血红蛋白，所以同时检测转铁蛋白可以减少由于血红蛋白抗原性消失而出现的假阴性结果，提高检出的精度[6]。而单克隆抗体法利用抗人血红蛋白或抗人红细胞基质抗体与胶体金结合，可检测微量的血红蛋白，对人体微量的消化道出血更敏感。而化学法则受的影响因素较多[7]。所以，三种检测方法各有其独自的适用性[8]。
综上所述，化学法快捷方便，但对人和动物的血红蛋白可发生反应，灵敏度比较低，而单克隆抗体能够直接测定人体血红蛋白，灵敏度比较高，不易受外界因素干扰，但很容易受到血红蛋白抗原性变化，出现假阴性结果。而联合免疫法则弥补了以上方法的不足，一旦化学法和单克隆方法的测定结果有疑问时，则可以结合患者实际病情测定结果，采用联合免疫法作为有效互补，进一步提高检测便隐血的准确性。
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（收稿日期：2014-09-25）