张小燕：惠州市惠城区河南岸街道办事处社区卫生服务中心广东惠州516027
袁学文陈毓杰：
惠州市第三人民医院广东惠州516008
【摘要】目的
探讨仙鹤复方水提物对子宫颈癌Hela细胞的抗肿瘤和辐射增敏性能。方法建立细胞实验模型，将药物作用于Hela细胞。采用MTT法测定不同浓度仙鹤复方提取物对Hela细胞增值的抑制；并以克隆形成率法分析研究仙鹤复方对Hela细胞的放射增敏作用。结果仙鹤复方对Hela细胞的生长有显著的抑制性，且随药物浓度和用药时间的增大逐渐增加；仙鹤复方能有效提升Hela细胞的放射增敏性。结论仙鹤复方能有效的抑制子宫颈癌Hela的增殖，并能有效提升其放射增敏性。
【关键词】仙鹤复方抗肿瘤辐射增敏Hela细胞?
【Abstract】ObjectiveTo investigate the anti-tumor and radiosensitizing research of Xianhe compound.
MethodsEstablish cells experimental models, and Xianhe compound was given to Hela cells. Hela cells proliferation inhibition by Xianhe compound was tested with MTT assay and radiosensitizing was tested with colony formation rate method.
ResultsXianhe compound could effectively inhibit the proliferation of Hela cells, and the inhibitory increased with the increase of Xianhe compound concentration and the administration time. Xianhe compound could effectively enhance the Hela cell radiosensitization.
ConclusionXianhe compound can effectively inhibit the proliferation of cervical cancer Hela, enhance radiosensitizing properties.
【Key words】Xianhe compound， Anti-tumor， Radiation sensitizer， Hela cells
【Author′s address】Huicheng district henanan street community health center， Huizhou city, Guangdong province， 516027 PRC?
doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2014.06.01
恶性肿瘤严重威胁着人类的生命健康，统计数据显示全球每年因恶性肿瘤死亡的病例超过600万，而且还有?1 000?万例处于死亡的边缘??［1］?。恶性肿瘤临床治疗方式主要有3种，包括：手术、放射以及化学治疗。但这些治疗的结果并不显著，因此，提高肿瘤患者临床疗效以及预后生活质量受到了广泛关注??［2］?。中医辨证认为肿瘤是由患者正气内虚、脏器功能紊乱、外邪毒入侵机体造成，邪毒蕴及于经络脏腑，造成机体阴阳失调，气血功能障碍，导致气滞、血瘀、痰凝、毒聚相互结交的一系列病理变化，日久而形成肿瘤??［3］?。仙鹤复方为我国中药复方，具有良好的抗肿瘤治疗效果。该复方由仙鹤草、白花蛇舌草、白英及甘草组成，临床有清热解毒、攻坚散结、祛瘀止痛的作用，对气滞、痰凝以及毒聚诱发的实体瘤，特别是肝癌、胃癌及宫颈癌的疗效显著??［4］?。本研究探讨了仙鹤复方对子宫颈癌Hela的抗肿瘤和辐射增敏性能。现报道如下。
1资料与方法?
1.1材料?
仙鹤复方中药材(仙鹤草、白花蛇舌草、白英及甘草)购自广州同仁堂中药店，由我院中药师鉴别确认。噻唑蓝(MTT)购自Sigma；TUNEL试剂盒购自中杉生物技术有限公司；优级新生小牛血清购自四季青生物工程公司；0?02%EDTA ；0?04 mol/L盐酸异丙醇； RPMI-1640 培养基； (AO)/(EB)染液；Hela细胞株由中国科学院上海细胞生物研究所提供。?
1.2仙鹤复方提取物制备?
以水煮法对仙鹤复方进行提取，取50 g药物［仙鹤草、白花蛇舌草、白英、甘草经化裁而成，组分中各药物质量比为（?1∶1∶?）］，粉碎后加入至10倍质量的水中，100度回流提取4 h。冷却后用旋转蒸发仪浓缩，真空干燥的仙鹤复方水提物。〖JP〗?
1.3细胞培养及给药方式?
取一定质量的小牛血清、青霉素、链霉素加入到RPMI-1640培养液中，使其浓度分别为：10%、100 U/ml、50 mg/ml。取Hela细胞接种于自配的培养液中，放入二氧化碳培养箱中培养(培养箱环境：湿度为37%、CO?2 浓度为5%)。细胞生长后进行传代，选对数生长期的Hela细胞进行实验。Hela细胞接种在96孔板中，浓度为1×10?5个/ml,继续培养24 h后用药物进行干预。取配置的仙鹤药液，给予0?2、0?4、0?8 g/ml 3个梯度浓度药物。实验用PBS组进行对照。给药后培养24 h，对Hela细胞凋亡情况进行检测。?
1.4观察指标?
对Hela细胞的增殖抑制率和辐射增敏性能进行观察。其中增殖抑制率以MTT法测定：按照上述的分组和给药浓度进行细胞培养。待培养24、48、72 h后，将上清液倒掉；加入50 μl MTT后继续培养4 h；将上清液吸弃后，加入100 μl盐酸异丙醇进行振荡；在570 nm波长下，对其吸光度值进行测定。抑制率(%) =［(1-OD实验组)/OD对照组］×100%。辐射增敏性能：以6、4、2、1、0的放射剂量对各组细胞进行照射，继续培养10 d，吸弃清液， 75%的乙醇固定后以Gemisa进行染色，观察计算克隆数。接种效率(PE)=［(对照组克隆数/细胞接种数)×100%］；存活分数(SF)=［实验组克隆数/(细胞接种数×PE)］×100%。?
2结果?
2.1仙鹤复方对Hela细胞的抑制率?
以MTT法对仙鹤复方对Hela细胞的抑制作用进行了研究，结果见表1，可以看出：仙鹤复方对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用，而且随着药物浓度的增大以及作用时间的延长，抑制效果显著增加。
2.2仙鹤复方对Hela细胞的辐射增敏实验?
以克隆形成率对辐射增敏进行了研究，结果见图1。随着辐射剂量的逐渐增大， Hela细胞的克隆数显著减少。尤其是在辐射剂量为6 Gy时，Hela细胞基本上没有克隆形成。?
接着，在Hela细胞辐射照射前加入仙鹤复方，其克隆数比例结果见图2，可以看出不同药物作用时间，克隆率明显不同，本研究结果表明照射前16 h给药的克隆形成率最小。
〖KH+1mmD〗
3讨论?
中医临床治疗肿瘤主要包括扶正和祛邪两部分，扶正主要是指对患者进行补气、补血治疗，同时给予滋阴温阳的调理；祛邪是指对患者进行清热解毒、化瘀软坚的治疗。仙鹤复方是当前临床抗肿瘤的经验组方，由仙鹤草、白花蛇舌草、白英、甘草经化裁而成，组分中各药物质量比为（1∶1）。组方中仙鹤草临床可以收敛止血、截疟、止痢以及解毒??［5］?；白花蛇舌草临床可以清热、利湿、解毒??［6］?；白英临床可以清热利湿、祛风、解毒??［6］?；甘草临床具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛的作用??［5］?。仙鹤复方调和诸药功能，临床具有清热解毒、攻坚散结的作用，同时还能有效对患者进行祛瘀止痛治疗。临床对气滞、痰凝和毒聚等诱发的实体瘤有较好的治疗作用。高静??［7］?在其研究中对仙鹤复方多糖的抗肿瘤活性进行了研究，高浓度药物对Hep-G2、JTC-26、S180、A549肿瘤细胞都有较高的抑制作用，抑制率分别为80?2%、88.3%、83?9%、89?3%。袁学文??［8］?在其研究中对仙鹤复方水提物在S180肉瘤及H22肝癌细胞中的增殖抑制率进行了研究，发现抑制率在20%~40%左右。?
本研究就仙鹤复方水提物对子宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率和辐射增敏性进行了研究。首先是以MTT法对Hela细胞的增殖抑制率进行了测定，结果表明仙鹤复方水提物对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用，而且随着药物浓度的增大以及作用时间的延长，抑制效果显著增加。从本研究的结果中可以发现0?8 g/ml药物对细胞的抑制性达到了(89?75±8?24)，可以认定为临床使用剂量的上限。我们进一步的分析研究了仙鹤复方水提物对Hela细胞辐射增敏性，结果发现仙鹤复方对Hela细胞具有较强的辐射增敏性，而且照射前16 h给药的克隆形成率最小。?
综上所述，仙鹤复方水提物能有效的抑制Hela细胞增殖，并对Hela细胞有较强的辐射增敏性。?
参考文献?
魏永燕，沈秀，刘培勋，等.中药仙鹤复方提取物急性毒性试验及对小鼠移植性肿瘤H22 的抗肿瘤作用研究［J］.海峡药学，2007，19(2): 27-29.?
［2］简晓顺,陈健清.近三年来我院抗肿瘤中成药用药分析［J］.现代医院,2013,13(4):67-68.?
［3］高凯民，周玲，陈金英,等.仙鹤草煎剂对HL-60细胞的体外诱导凋亡作用［J］.中药材，2000，23(9):561-562.?
［4］马丽萍，赵培荣，王留兴,等.仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用［J］.郑州大学学报:医学版，2007，42(1):149-151.?
［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京: 化学工业出版社，2005.?
［6］江苏新医学.中药大辞典(上册)［M］.上海: 上海人民出版社,1977.?
［7］高静,刘培勋,龙伟.仙鹤复方多糖纯化及体外抗肿瘤活性研究［J］.中华中医药学刊，2008，26(9): 2032-2033.?
［8］袁学文，陈毓杰，叶立新.中药仙鹤复方水提取物对S180肉瘤和H22肝癌细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用研究［J］.临床合理用药，2013，6(8C): 7-8.