王 岩
河南省郑州市黄河科技学院附属医院检验科,河南郑州 450063
[摘要] 目的 探讨乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA定量与血清乙肝病毒标志物的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清HBV-DNA含量，酶联免疫法检测血清乙肝病毒标志物。结果 大三阳组HBV-DNA阳性率及含量显著高于其他组，差异有统计学意义(P＜0.05)；HBeAg阳性患者中，HBV-DNA阳性率为100%，与HBeAg阴性组比较，两者差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 要准确了解乙型肝炎患者体内的病毒复制情况，采用FQ-PCR和HBV血清学标志物检测相结合的方法，才能在乙型肝炎的诊断、病情判断、治疗方案的选择及预后方面提供可靠的依据。
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关键词 HBV-DNA; FQ-PCR;乙型肝炎血清标志物
[中图分类号] R450;R512.62 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)03(b)-0177-02
[作者简介] 王岩（1975.2-），女，河南郑州人，硕士，主管技师，研究方向：生物化学与分子生物学。
乙型肝炎是严重影响人民健康的世界性慢性疾病，是引起肝硬化、原发性肝癌的主要原因。实时荧光定量PCR是一种敏感的反映HBV病毒水平的检测方法，可以为病情判断和药物治疗提供依据。该文旨在通过比对实时荧光定量PCR方法和传统的ELISA法检测乙型肝炎病毒在不同模式下的检测结果，探讨两种方法在检测乙型肝炎方面的相关性。现分析2012年5月—2013年5日间来该院就诊的322例乙型肝炎患都的临床资料，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取来该院就诊的322例乙型肝炎患者为研究对象。其中男性158例，女性164例，平均年龄38.2岁。实验分为4组，分别为大三阳组(50例)；小三阳组(119例)；①⑤阳性组(56例)；②④⑤阳性组(97例)。
1.2 试剂与仪器
仪器为ABI7500Fast荧光定量分析仪。
1.3 方法
HBVDNA用FQ-PCR检测；HBV血清标志物用ELISA检测，按照试剂盒说明操作。
德国罗氏公司荧光量PCR仪为德国赛博公司产品。FQ-PCR方法检测HBV-DNA试剂盒由广州安基因科技有限公司提供,ELISA法试剂购自北京万泰生物药业股份有限公司，检测仪器为BIO-RADMODEL550型酶标仪。
采集空腹静脉血，分离出血清，采用ELISA方法检测HBgAg、HBsAb、HBeAg、HBeA、HBcAb，用FQ-PCR法检测HBV-DNA, 用已知含量梯度的HBV-DNA标准品为参考照物，对比得出本DNA含量，并设置阴性对照，采用室内Roche免疫质控血清进行检测。操作方法和结果判定均严格按说明书执行。HBV-DNA>5×103copies/ml为阳性，<5×103copies/ml为阴性。
1.4 统计方法
数据用spss19.0统计学软件对数据进行处理。计数资料采用χ2检验。
2 结果
不同血清模式组中乙肝病毒标志物阳性率。
322例标本中，第①组(大三阳组)，HBV-DNA阳性率及HBV-DNA含量显著高于其他组，差异有统计学意义(χ2=29.835，p＜0.01)；第②组、第③组之间差异不大，但和第④组比较差异有统计学意义(χ2=60.393，p＜0.01)，见表1、2。
不同血清模式组中HBV-DNA含量显示，不同组别的HBV-DNA含量有较大差异。第①组HBV-DNA平均含量为3.86 ×10IU/mL，和后三组比较，差异有统计学意义。
在50例HBeAg阳性患者中，HBV-DNA阳性率为100%，明显高于与HBeAg阴性组，两者差异有统计学意义(χ2=75.983，p<0.01)。见表3。
3 讨论
ELISA法检测乙肝病毒标志物是传统的灵敏度高、特异性较好的方法 [1]，但它只能反映乙肝病毒入侵后机体的免疫状态，而FQ-PCR则是从基因水平定量反映乙肝病毒是否感染、复制的一种更灵敏的检测方法，目前已广泛的应用于临床。
本研究显示不同的乙型肝炎血清标志物表达模式，HBV-DNA的含量相差甚大。在大三阳组中HBV-DNA阳性率为100%，含量超过平均含量为3.86×107IU/mL，显著高于其它组，表明大三阳患者体内乙肝病毒复制活跃，传染性强。HBeAg位于乙肝病毒的核心，是HBV基因组前C/C区段的mRNA表达，通常被认为是病毒复制活跃、传染性强的标志[2]。该研究结果表明，50例HBeAg阳性患者中，HBV-DNA阳性率为100%，二者具有明显的伴随关系，呈正相关性;而在174例HBeAg阴性的患者中，也并非没有HBV-DNA的复制，推测可能与HBV基因组发生突变有关。基因突变时，HBeAg表达会减弱甚至消失，因此即使抗-HBe出现，病毒复制并没有停止，一部分人群仍具有传染性，并且此类人群以肝硬化者居多[3]，需要引起重视。本研究中，在HBsAb阳性的患者中，检出7例HBV-DNA阳性，说明即使抗-HBs及抗-HBe出现，病毒依然具有低水平的复制能力，这可能是机体正处于隐形感染的恢复期或病毒已发生变异[4]，因此，HBV血清标志物不能取代HBV-DNA定量检测。
综上所述，在乙型肝炎的诊断和治疗方面，单纯检测HBV血清标志物是不全面的，应结合HBV-DNA定量来对病情进行判断和治疗[5]。HBeAg转阴并不意味这HBV病毒已被清除[6]。因此，要准确了解乙型肝炎患者体内的病毒复制情况，采用FQ-PCR和HBV血清学标志物检测相结合的方法，才能在乙型肝炎的诊断、病情判断、治疗方案的选择方面提供更加可靠的依据。
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参考文献
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(收稿日期:2013-12-05)