姜艳艳1 张连民2
1.东莞市厚街医院妇产科，广东东莞 523960；2.东莞市沙田医院妇产科，广东东莞 523000
[摘要] 目的 研究子宫内膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表达规律,探讨三者与子宫内膜癌发生发展的关系。 方法 应用免疫组化SP法检测正常子宫内膜、子宫内膜增生症、子宫内膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表达，分析它们与各项临床病理参数之间的关系及三者之间的关系。 结果 PI3K、p-AKT、P27的表达在3组间比较均有显著差异（P<0.05），PI3K、p-AKT的表达与子宫内膜癌的临床分期和组织学分级有关（P<0.05），P27的表达与子宫内膜癌的组织学分级有关（P<0.05）。P27与PI3K、P27与p-AKT均呈负相关（P<0.01）。 结论 PI3K、p-AKT、P27的表达与子宫内膜癌的发生和发展有关，三者的表达异常参与了子宫内膜癌的发生。
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关键词 子宫内膜癌；PI3K；p-AKT； P27；免疫组化
[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）10（a）－０057-02
子宫内膜癌(endometrial carcinoma)，是指原发于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，是一种常见的妇科恶性肿瘤，其发生率约占女性总癌瘤的7%，占女性生殖道恶性肿瘤的20%~30%。其确切病因及发病机制尚不清楚。研究表明PI3K/AKT信号通路异常与许多恶性肿瘤的发生发展有关。该研究2009—2013年间通过测定子宫内膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表达规律、临床意义及三者之间的关系,探讨三者与子宫内膜癌发生发展的关系。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
子宫内膜癌标本取自东莞市厚街医院妇产科和病理科2009—2013年手术切除的子宫内膜样腺癌标本55例（术前均未接受化疗及激素治疗，且不合并其他恶性肿瘤），按FIGO进行临床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期19例，Ⅲ期14例；组织学分级：G1级29例，G2级14例，G3级12例；无肌层浸润20例，浅肌层浸润(<1/2) 16例，深肌层浸润(>1/2) 19例；无淋巴结转移46例，有淋巴结转移9例：患者年龄38～70岁，平均54.3岁。选取同期因功能失调性子宫出血行子宫切除术或诊刮术病人的异常子宫内膜30例：标本用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，有完整的临床和病理资料。选取同期因宫颈CIN行子宫全切术的20例患者的正常子宫内膜组织作为正常对照。
1.2 试剂
兔抗人PI3K、p-AKT、P27单克隆抗体，免疫组化SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 结果判定
以细胞浆或细胞核内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞。采用乳腺癌切片作为阳性对照，PBS代一抗作为阴性对照。结果判断标准：随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，先根据阳性细胞数所占的百分数计分：<5%为0分，5%~25%为1分，26%~50%为2分，51%~75%为3分，>75%为4分；再根据阳性细胞染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;然后根据两者相加所得的总分进行结果判定：0~l分为阴性(-)，2~3分为弱阳性(+)，4~5分为中度阳性(++)，6~7分为强阳性(+++)。该研究在此划分类型的基础上将结果合并为阴性(0~1分)，阳性(2~7分)。
1.4 统计方法
实验数据应用spss15.0软件进行统计分析。免疫组化实验结果应用等级资料的秩和检验对相关组间进行显著性检验；采用Spearman相关分析法对PI3K、p-AKT和P27蛋白表达的关系进行相关性分析。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 PI3K、p-AKT、P27在不同子宫内膜组织中的表达
2.2 PI3K、p-AKT和P27在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理参数的关系
该实验结果显示PI3K、p-AKT的表达与子宫内膜癌的临床分期和组织学分级有关，差异有统计学意义(P<0.05)，与患者年龄、淋巴结转移和肌层浸润深度无关，差异无统计学意义(P>0.05)。P27的表达与子宫内膜癌的组织学分级有关，差异有统计学意义（P<0.05），与临床分期、患者年龄、淋巴结转移和肌层浸润深度无关，差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 PI3K、p-AKT和P27在子宫内膜癌组织中表达的相关性
55例子宫内膜癌病例中，PTEN、p-AKT表达同为阳性者8例，同为阴性者3例，Spearman相关分析表明二者呈显著负相关，差异有统计学意义（r=-0.480,P<0.01）。P27、p-AKT表达同为阳性者6例，同为阴性者4例，Spearman相关分析表明二者呈显著负相关，差异有统计学意义（r=-0.403, P<0.01）。
3 讨论
PI3K／Akt 与子宫内膜癌 PI3K／Akt通路广泛存在细胞中，参与细胞生长、增殖、分化调节等各方面。磷脂酰肌醇-3 羟基激酶（PI3K）是一个酯酶，当细胞受生长因子等刺激因子刺激后，细胞内 PI3K 可被 G 蛋白偶联受体、蛋白酪氨酸激酶受体或 Ras 蛋白激活，激活后的 PI3K 对磷脂酰肌醇环上的 3 位羟基进行磷酸化从而产生磷酸化的磷脂酰肌醇.AKT是一种丝/苏氨酸蛋白激酶又称蛋白激酶B，对细胞存活有重要作用。AKT转位到细胞膜以及AKT活化所需的308位苏氨酸(Thr308)和473位丝氨酸(Ser473)磷酸化是AKT活化的关键环节，都是依赖于 PI3K完成的[1-2]。PI3K突变促使恶性肿瘤的发生[3]，磷酸化的AKT通过作用于多种下游分子，影响细胞周期进展，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，从而导致肿瘤发生与发展。该研究结果显示PI3K、p-AKT在子宫内膜癌组织中呈高表达，明显高于正常子宫内膜和子宫内膜增生症，差异有统计学意义（P<0.05）。因此推测PI3K过度激活，AKT磷酸化增加，活性增强可能促使子宫内膜癌的发生，此外该研究显示PI3K、p-AKT的表达与子宫内膜癌的临床分期和组织学分级有关，但与患者年龄、淋巴结转移和肌层浸润深度无关，表明PI3K、p-AKT的表达异常与子宫内膜癌的发展有关。
P27与子宫内膜癌 P27是一种非特异的CDKIs，调节细胞由Gl-S期转变，主要抑制cyclinE-CDK2和cyclinA-CDK2复合物。P27在G0和G1期表达并在细胞开始进入S期时降低，其在组织和肿瘤的非增殖部分呈现强阳性表达，因此P27蛋白的稳定对于维持细胞的稳态和稳定性方面非常重要。P27蛋白的低表达在人类多种肿瘤中均有发现，包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结直肠癌、前列腺癌和宫颈癌，在许多恶性肿瘤中其降解增强提示肿瘤的预后不良[4] ，P27 基因缺陷小鼠表现躯体庞大、多个器官增生、垂体肿瘤发生率增高[5]。P27降解减少伴随着子宫内膜细胞增生减少[6]，表明其在人类恶性肿瘤发病机制中的重要性。该研究结果显示P27在正常子宫内膜（85.00%）、子宫内膜增生症（58.82%）、子宫内膜癌（21.43%）中的阳性表达率呈逐渐下降趋势，差异有统计学意义（P<0.01）。P27的表达与子宫内膜癌的组织学分级有关（P = 0.02），与临床分期、患者年龄、淋巴结转移和肌层浸润深度无关，证实了P27蛋白缺失在子宫内膜癌发病机制中的重要性。但有研究表明P27表达与肺癌的分期及淋巴结转移有关，与该研究结果不同，可能是不同肿瘤之间的差异造成的[7]。
PKB是PI3K下游的重要靶点，它通过磷酸化细胞周期相关蛋白如P27、cyclin D、凋亡前蛋白等介导细胞事件。PI3K抑制者LY294002阻止细胞增殖，导致G1期细胞积累，P27表达增加，提示P27是PI3K/AKT通路的下游效应点[8]。该实验发现子宫内膜癌中P27蛋白表达明显下降，而PI3K、p-AKT表达明显增加，P27与PI3K、p-AKT蛋白表达存在明显的负相关，提示PI3K激活导致p-AKT活化增加，活化的AKT可能通过下调 P27的表达，使子宫内膜细胞逃离凋亡，不断增生，导致子宫内膜癌的发生，三者的共同作用促使了子宫内膜的发生发展。已有研究表明PI3K抑制剂 LY294002、硫利达嗪通过PI3K/AKT通路抑制肿瘤的生长，为恶性肿瘤的治疗提供了新的思路[9]。
综上，PI3K/PK通路在子宫内膜癌中的研究刚刚起步, 有关该通路及其上游刺激因子、下游信号因子与子宫内膜癌发生发展的关系将成为未来研究的热点，为子宫内膜癌病因学研究及寻找新的治疗靶点提供新思路。
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（收稿日期：2014-06-20）