饶展鹏1 黄丽好2
1.暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院胸外科，广东深圳 518020 ；2.深圳市中医院综合病区，广东深圳 518020
[摘要] 目的 探析HOX基因对早期食管癌的诊断及预后的指导意义。 方法 入选该院2008年2月—2009年2月食管癌患者80例为实验组，同期入选体检健康者80名为研究对照，比较人食管癌细胞系及正常细胞系CAES及EC109中表达HOX基因情况， 评估食管癌患者的HOX基因表达阳性组及阴性组的术后生存率情况。结果 人食管癌细胞系CAES及EC109中HOX基因表达阳性情况显著高于正常细胞系，差异有统计学意义（P<0.05）； 食管癌患者HOX基因表达阳性组1、3、5年生存率显著低于食管癌HOX基因表达阴性组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 食管癌患者细胞系表达HOX基因阳性率较高，HOX基因表达阳性食管癌患者生存率较低，HOX对评估早期食管癌诊断及预后具有重要临床价值。
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关键词 ]临床意义；细胞系；食管癌；HOX基因
[中图分类号]R735.1[文献标识码]A[文章编号]1674-0742（2015）03（c）-0095-02
Diagnostic and Prognostic Significance of HOX Gene for Early Esophageal Cancer
RAO Zhanpeng1 HUANGLihao2
1.The Second Clinical Medical College of Jinan University Department of thoracic surgery of Shenzhen People’s Hospital，Shenzhen 518020，China；2.Comprehensive Ward of Shenzhen Chinese Traditional Medical Hospital，Guangdong 518020，China
[Abstract] Objective To explore and analyze the diagnostic and prognostic significance of HOX gene for early esophageal cancer. Methods 80 cases of patients with esophageal cancer from February 2008 to February 2009 in our hospital were selected as experiment group， while 80 cases of healthy subjects were selected as control group. HOX gene expression of esophageal cancer cell and normal gene， CAES and EC109 were compared. Postoperative survival rate of positive and negative HOX gene expression of patients with esophageal cancer were evaluated. Results HOX gene expression of esophageal cancer cell line CAES and EC109 was significantly higher than normal cells. The difference was statistically significant （P <0.05）；The 1-year， 3-year， and 5-year survival rate of positive expression of of patients with esophageal cancer were significantly lower than HOX gene expression negative group. The difference was statistically significant （P <0.05）. Conclusion HOX gene expression positive rate of patients with esophageal cancer is high， while survival rate of HOX gene expression positive patients is low. HOX has important clinical value in evaluate early esophageal cancer diagnosis and prognosis.
[Key words]Clinical significance； Cell line； Esophageal cancer； HOX gene
[基金项目]2014深圳市科技计划项目（JCYJ201404161 22811966）。
[作者简介]饶展鹏（1981.6-），男，广东人，学士，主治医师，从事胸外科方向的研究 。
食管癌在我国的发病率较高，早期无特异性症状不易被发现，而食管癌的临床治疗效果不甚理想，5年生存率仍较低，预后较差[1]。有研究指出，食管癌患者Homeobox（HOX）基因阳性表达率较高，HOX基因可作为早期食管癌的诊断及判断预后的重要指标[2]。探析HOX基因对早期食管癌的诊断及预后的指导意义十分关键，故该院探析2008年2月—2009年2月人食管癌细胞系CAES及EC109表达HOX基因情况，效果满意，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机抽取该院2008年2月—2009年2月80例食管癌患者，经手术及病理检查结果证实。其中男43例，女37例，年龄32~50岁，平均年龄（45.3±2.1）岁。病理分期：Ⅰ期52例，Ⅱa期28例；同期入选体检健康者80名为研究对照，其中男42例，女38例，年龄32~50岁，平均年龄（45.2±1.2）岁，两组研究对象的性别、平均年龄等基本情况大体一致。北京市肿瘤防治研究所遗传室保存人食管癌细胞系CAES及EC109，Gibico公司提供DMEM培养基。
1.2方法
细胞培养：将灭活胎牛血清10%加入培养基，培养基中加入5%CO2、37℃培养箱内予以培养细胞。提取RNA：细胞总RNA进行TRlzol法提取，采集对数生长期细胞，将TRIzol加入贴壁细胞，1 mL/10 cm2，置于室温下5 min后放置1.5mL离心管内，对入氯仿0.2 mL，震荡15 s混匀，置入室温2 min，4℃12000×g，离心15 min，采集上清液，将异丙醇0.5ml加入，混匀，置于室温10 min，4°C12000×g，离心10 min，除去上清液，对入75%乙醇1 mL洗涤，干燥。应用适宜DEPC水溶解，应用甲醛变性胶电泳鉴定产物2~4 μL。应用RNase-free DNase处理RNA样品，37 ℃1 h，2 μL（1 μg/μL）总RNA加入1 μL（10 mmol/L）dNTP、1 μL（0.5 μg/μL）Oligo，对入DEPC水到13 μL，65℃下5 min变性，置于冰上≥1 min，加入1 μL SuperscriptⅢ反转录酶、2μL DTT（0.1 mol/L）、1 μLRNasin（40 U/μL）、4μl PCR缓冲液。50℃1 h，70℃15 min，即刻置于冰上，加入80 μlDEPC水，稀释5倍cDNA产物，25 μL体系内加入cDNA1 μL予以PCR，95 ℃热启动5 min，94 ℃变性45 s、适宜温度45 s、72 ℃合成45 s，循环38次后72 ℃后延伸7 min。
1.3仪器与试剂
Ambion公司生产的DNA-freeTM试剂盒。
1.4 评估标准
将1%甲醛变性胶电泳加入8μL反应产物中，溴化乙腚染色，紫外线下观察，阳性表达：出现大小相应条带[3]。
1.5 统计方法
采用spss 18.0软件系统分析所有数据，计数资料以百分比描述，发生率的比较用c2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 CAES及EC109中表达HOX基因情况
人食管癌细胞系CAES及EC109中HOX基因表达阳性情况显著高于正常细胞系，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 食管癌患者的HOX基因表达阳性组及阴性组的术后生存率情况
食管癌患者HOX基因表达阳性组1、3、5年生存率显著低于食管癌HOX基因表达阴性组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
3 讨论
食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2%，以进行性吞咽困难为典型症状，临床多见于40岁以上男性[4]。我国是食管癌高发国家，食管癌早期无显著症状，可有吞咽梗噎感，临床多进行手术治疗。而食管癌的临床治疗效果不甚理想，术后生存率较低。食管癌的早期诊疗对预后具有重要的临床意义[5]。目前，对于食管癌HOX基因表达已成为国内外医学学者的重要研究课题[6]。
该研究探析HOX基因对早期食管癌的诊断及预后的临床意义，结果显示：人食管癌细胞系CAES及EC109中HOX基因表达阳性情况显著高于正常细胞系，差异有统计学意义（P<0.05）；食管癌患者HOX基因表达阳性组1年生存率、3年生存率、5年生存率显著低于食管癌HOX基因表达阴性组，差异有统计学意义（P<0.05），与韩杨等[7]的研究结果大体一致，多种基因调控的共同完成胚胎发育过程，胚胎调控失调可产生肿瘤细胞，HOX基因主要有两类，I类共39个基因，为成簇排列，分为HOXA、HOXB、HOXC、HOXD四簇，II类散在分布。HOXI类基因编码蛋白为主要转录调节因子，对胚胎的生长分化及发育产生调节作用。HOX基因在多种肿瘤中表达水平较高，而在正常细胞中缺失表达或低表达，肿瘤细胞HOX基因阳性表达组的生存率更低，有助于判断预后[8]。而HOX基因在癌细胞中的具体作用机制尚在研究中。综上所述，食管癌患者细胞系表达HOX基因阳性率较高，HOX基因表达阳性食管癌患者生存率较低，HOX对评估早期食管癌诊断及预后具有重要临床价值。
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参考文献]
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（收稿日期：2014-12-25）