孔 炯
江苏省常熟市第二人民医院肿瘤内科，江苏常熟 215500
[摘要] 目的 研究分析FOLFOX 方案化疗治疗结直肠癌患者对免疫细胞数的影响。方法 择取2011年6月—2014年1月期间在该院接受治疗63例结直肠癌患者作为实验组，均采用FOLFOX方案化疗治疗，通过流式细胞仪检测患者化疗前、化疗后1周、2周、4周的外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的活性情况，并且结合临床分期对亚组进行对比分析。同时选取同期体检的63例健康人作为对照组（健康者不需治疗干预）。结果 实验组患者外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK细胞数量明显低于对照组，但是CD8+细胞比值明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞数量的变化情况与不同病理分期有所联系，I、II期结直肠癌患者相比III、IV期患者，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 FOLFOX方案化疗治疗结直肠癌获得了显著成效，同时对机体免疫力产生的影响较小。
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关键词 FOLFOX方案；化疗；结直肠癌；免疫细胞数；影响
[中图分类号] R574 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）08（c）－０074-02
[作者简介] 孔炯（1979.1-），男，江苏常熟人，硕士研究生，主治医师，所在科室：肿瘤内科，研究方向：胃肠肿瘤。
结直肠癌是恶性肿瘤中常见的一种疾病，由于经济的发展、人们生活水平的改善[2]，间接提高了结直肠癌的患病率。癌细胞转移对结直肠癌患者的临床预后具有重要影响，患者免疫功能情况对肿瘤的进展、预后也有一定影响。化疗治疗能够明显提高结直肠癌患者的生存率，提高其生活水平。但是化疗治疗的同时还会产生一定的不良反应，导致患者免疫功能受到一定影响。若是免疫功能出现持续性降低，将增加肿瘤的复发率及转移率。现择取2011年6月—2014年1月期间在该院接受治疗63例结直肠癌患者，进一步了解FOLFOX方案化疗对其免疫细胞数的影响，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
择取在该院接受治疗63例结直肠癌患者作为实验组，均通过病理检查得以确诊。结合国际TNM分期标准把结直肠癌患者予以分期：I期者3例，II期者10例，III期者32例，IV期者18例。包括35例女性患者，28例男性患者。年龄均在27~79岁之间，平均年龄（46.87±4.21）岁。同时择取同期体检的63例健康人作为对照组，其中32例女性患者，31例男性患者。年龄均在25~77岁之间，平均年龄（44.87±3.96）岁。全部受检者均没有免疫系统疾病，没有应用免疫抑制剂，两组患者的临床一般资料之间，差异无统计学意义（P>0.05），研究存在可比性。
1.2 方法
FOLFOX方案化疗：第1天，奥沙利铂，剂量为85 mg/m2 ，予以静脉滴注；亚叶酸钙，剂量为400 mg/m2 ，进行静脉滴注；氟尿嘧啶，剂量为400 mg/m2，进行静脉推注，氟尿嘧啶2.4 g/m2持续静脉滴注46 h。2周1次，2次为1个疗程。
1.3 检测方法
取经肝素抗凝处理的新鲜外周血标本，剂量为100 μL，溶入单克隆抗体（抗CD16+56PE、抗CD8PE、抗CD4PE、抗CD3FITC），混合均匀，室温避光20 min染色。再加入1.5 mL红细胞裂解液，当混合均匀后室温、避光静置10 min，使红细胞破坏。以250×g的标准离心5 min，然后弃上清液。每管溶入2.0 mL（浓度为0.1%）叠氮钠的磷酸盐缓冲液[2]，混合均匀，以100×g的标准离心5 min，弃上层清液。再加入1.0 mL PBS，混合均匀，2 h内上机检测。通过流式细胞仪Cell Quest 软件（型号为FACSCan）取得数据并分析。将FSC2H/SSC2H设定为淋巴细胞门，用IgG/FITC/IgGaPE明确FL1、FL2的非特异性结合水平[3]。同时，调整SSC、FSC的电压；FL22FL1%荧光补偿、FL12FL2%荧光补偿；FSC阈值。每管得到1万个细胞。
将对照组63例健康者的外周血细胞数的水平作为标准，评判实验组患者治疗前、后外周血细胞的变化情况。
1.4 统计方法
选用spss13.0统计学软件对试验数据实施系统化处理，通过均数±、平均数（x±s）表示计量数据，运用χ2对试验所得计数数据进行检验，运用t对所得计量数据进行检验。
2 结果
经化疗治疗后，实验组患者在1周、2周、4周时的外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK细胞数量、CD8+细胞比值之间差异无统计学意义（P>0.05）。实验组患者外周血CD4+、CD3+以及CD4+/CD8+、NK细胞数量明显低于对照组，但是CD8+细胞比值明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
实验组结直肠癌不同分期患者的CD4+/CD8+细胞比值、NK细胞数量、CD4+细胞、CD3+细胞与对照组相比明显减少；CD8+细胞值明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。I期-IV期结直肠癌患者的NK细胞数量、CD4+/CD8+细胞比值、CD4+细胞、CD3+细胞逐渐减少，CD8+细胞比例逐渐上升，但是I期与II期结直肠癌患者之间；III期与IV期结直肠癌患者之间，差异无统计学意义（P>0.05）。III期、IV期结直肠癌患者NK细胞数量、CD4+/CD8+细胞比值、CD4+细胞、CD3+细胞明显低于I期、II期；CD8+细胞比例明显高于I期、II期，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3讨论
机体抗肿瘤免疫机制相对复杂[4-5]，通常抗肿瘤免疫主要是细胞免疫，但体液免疫也发挥了重要作用。该次研究中，结直肠癌患者外周血内CD4+/CD8+细胞比值、CD4+、CD3+均显著小于健康者，但是CD8+细胞比例显著高于健康者，这与以往研究结果相一致[6]。由此表明，结直肠癌患者免疫功能低于健康者水平，其机制可能受到肿瘤发生、发展期间分泌过多的免疫抑制因子有一定关系。结直肠癌患者通过FOLFOX方案化疗前、化疗后1周、2周、4周，外周血淋巴细胞亚群、NK细胞活性没有明显差异，可见该种方案在对肿瘤病灶转移治疗有效的情况下，对患者机体免疫功能没有产生显著影响。随着结直肠癌患者癌细胞的发展，从I期-IV期患者机体外周细胞免疫功能不断减少[7]，I期、II期与III期、IV期患者之间明显差异性，说明结直肠癌患者免疫功能与病理分期存在负相关性，患者病理分期越晚，免疫功能越差。反之，患者免疫功能越差[8]，说明肿瘤病理分期越晚、临床预后越差。所以。患者免疫功能能够间接说明患者的预后情况。结直肠癌患者NK细胞数量显著性小于健康者，同时与病理分期有一定关联，病理分期越晚，外周血NK细胞数量越低，关键原因可能是因为消灭肿瘤细胞期间，耗费了大量的NK细胞，肿瘤细胞所产生的免疫抑制因子让NK活性减弱，NK 细胞将在血液循环过程中再分布。该次研究充分验证了结直肠癌患者外周血细胞免疫功能减弱，也就是机体抗肿瘤免疫功能衰弱，致使肿瘤细胞脱离了免疫监视持续生长。所以，通过流式细胞仪对患者外周血T淋巴细胞、NK细胞等指标进行检测时，可用于监测结直肠癌患者的免疫状态，说明结直肠癌患者的免疫辅助治疗重点在于提高NK 细胞、CD4+、CD3+数量，增强患者免疫功能。
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参考文献
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（收稿日期：2014-05-28）