闫倩倩
山东省临沂市食品药品检验检测中心山东省临沂市276003
【摘 要】目的：建立北豆根药材中有效成分蝙蝠葛碱的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为DiscoveryC18柱（250×4.6mm，5μm），以乙腈-0.05%三乙胺水溶液（40:60）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为282nm。结果：蝙蝠葛碱浓度在0.82～9.84μg·ml-1范围内，浓度与其峰面积呈良好线性关系，平均回收率为99.03%，RSD为1.41%。结论：该法简便快捷，重复性好，可用于北豆根药材中蝙蝠葛碱的质量控制。
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关键词 北豆根；蝙蝠葛碱；高效液相色谱法
北豆根为防己科植物蝙蝠葛（MenispermumdauricumDC.）的干燥根茎，主要含蝙蝠葛碱、蝙蝠葛诺林碱、粉防己碱等多种生物碱类成分。现行《中国药典》2010年版北豆根标准中，无北豆根中的主要成分蝙蝠葛碱的含量测定，本文参考相关文献，对高效液相色谱法测定北豆根中蝙蝠葛碱的含量进行了研究。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)，蝙蝠葛碱对照品（111867-201202，中国药品生物制品检定所），北豆根药材（由临沂市中药材公司供应），乙腈色谱纯，其余试剂、试药均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为DiscoveryC18柱（250×4.6mm，5μm），以乙腈-0.05%三乙胺水溶液（40:60）为流动相，流速为1.0ml?min-1，检测波长为282nm，温度为25℃。
2.2.1对照品溶液的制备
取蝙蝠葛碱对照品5mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成蝙蝠葛碱储备液。精密量取上述储备液1ml，置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
取干燥北豆根药材粉末(40目)0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加浓氨水lml及氯仿30ml，浸泡过夜；再加氯仿50ml，回流提取3h。提取液蒸干，残渣加甲醇转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.3系统适用性考察
取蝙蝠葛碱对照品、北豆根供试品溶液，按“2.1”条件进行测定，结果如下图：
8、10、12μl注人高效液相色谱仪中测定，以进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得蝙蝠葛碱回归方程分Y=432201.33X+567.30，r=0.9996。表明蝙蝠葛碱在0.82～9.84μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。
2.5精密度实验
精密吸取同一对照品溶液20μl，重复进样6次，记录色谱图，结果RSD为2.53%(n=6)。
2.6稳定性实验
取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8h，按“2.1”项下色谱条件分别进样20μl,RSD为1.83%，表明供试品在8h内稳定性良好。
2.7重复性实验
同一批供试品，精密称取6份，按“2.2.2”下方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，RSD为1.69%，表明方法重复性良好。
2.8加样回收率实验
精密称取6份已知含量的供试品适量,加入等量的蝙蝠葛碱对照品,按样品含量测定项下的方法操作,记录色谱图,计算加样回收率。其平均回收率为99.03%,RSD为1.41%(n=6)。
2.9样品含量测定
取3批供试药材，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果分别为1.15%、1.08%、1.13%。
3讨论
（1）检测波长的选择：取蝙蝠葛碱对照品溶液，照紫外分光光度法在190～500nm处扫描。溶液在282nm波长处有最大吸收，参考相关文献[1][2][3]，确定检测波长为250nm。
（2）流动相的选择：由于北豆根药材所含生物碱类成分较多，实验中考察了中性、酸性、碱性流动相系统如甲醇：水、乙睛：水、甲醇：0.1%磷酸水溶液、乙睛：0.1%三乙胺水溶液、乙睛：0.05%三乙胺水溶液、甲醇：乙睛：0.05%三乙胺水溶液等，结果表明:以乙睛：0.05%三乙胺水溶液为流动相，能使各指标成分色谱峰分离较好，保留时间适中。
（3）本文所建立的蝙蝠葛碱含量测定方法准确可靠，重复性好，回收率高，操作简单可行且能提高工作效率，可以用于北豆根药材的质量分析。
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参考文献
[1]张艳,石玉生,王栋.高效液相色谱法测定北豆根精制总碱胶囊中蝙蝠葛碱含量[J].中医药信息,2008,25(3):69-71.
[2]朱孝芹,臧亚如,张欢等.家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究[J].时珍国医国药,2008,19(3):596-597.