摘 要：目的：评价酶法检测糖化白蛋白(GA)的分析性能及室内质控性能。方法：参考CLSI EP文件、功效函数图和西格玛度量图评价酶法检测GA的分析性能及室内质控性能。收集2020年1—11月GA的室内质控数据，以室内质控的累积变异系数(CV)作为项目的不精密度，以全球室内质控室间比对同方法学组的均值为靶值计算偏倚，选择10%为总允许误差，借助操作过程规范图设计和西格玛度量图设计符合室内质控方法，从而提高误差检出概率(Ped),降低假失控概率(Pfr)。结果：酶法检测不同浓度GA的批内精密度分别为0.66%和0.59%,总的精密度分别为0.45%和0.71%,均小于厂家声明的标准；正确度验证显示与配套校准品标示值的偏倚为-0.37%,<1/2TEa,在允许范围内；GA在0～3.5g/dl浓度范围内程线性(R2=0.999);GA最大稀释倍数为10,临床可报告范围是0～36g/dl;生物参考区间验证显示本研究选择的参考个体GA水平符合厂家试剂说明书给定的参考区间；GA每天测定质控品个数2,选择1-5S单质控规则即可满足Ped>90,Pfr<5,西格玛7.5。结论：酶法检测GA分析性能及室内质控性能良好，可满足临床要求。
关键词：糖化白蛋白 性能评价 质量控制
Evaluation of Analytical Performance and Internal Quality Control Procedure of an Enzymatic Method for Measurement of Glycated Albumin
HU Ting SUO Minghuan WANG Weijia
Center for Clinical Laboratory, Zhongshan Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University;
Abstract：Objective:To evaluate the analytical performance and internal quality control procedure of an enzymatic method for measurement of Glycated albumin by the ADVIA2400 chemistry system.Methods:The imprecision, accuracy, limit of quantification(LoQ), linearity and clinical reportable range(CRR) were evaluated according to the recommendation of CLSI documents(EP-15 A2, EP-17 A, and EP-6 A). The internal quality control(IQC) data were collected from January 2020 to November 2020.The imprecision was calculated by accumulative CV, while the bias was calculated by the mean value of the IQC data across of global regions. Individual quality control scheme for GA analysis was developed combined with Function Power Graph and Six Sigma Chart based on 10% allowable total error(TEa) to improve the probability of error detection(Ped) and reduce the probability of false rejection(Pfr).Results:The CV values of the within-run imprecision at low and high levels of the QC subjects were 0.66%,0.59%,respectively.The CV values of the total imprecision at low and high levels of the QC subjects were 0.45%,0.71%,respectively.The bias% was-0.37% when the manufacturer's standard material was used to assess the accuracy of the assay. Excellent linearity was observed in the range of 0～3.50 g/dl(R2=0.999).CRR was 0～36 g/dl, with the maximum dilution of CRR was 10 time. Biological reference interval validation showed that the overall level of GA in this study reference individuals conform to the standard of manufacturer for the population.It was also demonstrated that the index of 90%Ped, 5%Pfr, and 7.5 Sigma could be achieved using only 1-5 S quality control rules with two levels of the QC in daily routine work.Conclusion:The analytical performance of using Lucica GA-L kit in the ADVIA2400 analyzer was excellent and could meet requirements of the clinical application.
Keyword：Glycated albumin; Evaluation of analytical performance; Quality control;
糖化白蛋白(Glycated albumin, GA)是血中葡萄糖与血浆中白蛋白发生非酶促反应的产物。相对血浆中其他蛋白而言，白蛋白的半衰期较长并且浓度最高，所以最容易被糖化。糖化白蛋白反映患者检测前2～3周的平均血糖水平，主要用于监测糖尿病患者短期的血糖水平并指导临床治疗方案的调整。与糖化血红蛋白相比，GA反映的是更短期的血糖波动，且对于存在贫血、血红蛋白变异体等影响红细胞寿命的糖尿病患者，GA更能反映真正的血糖控制情况[1-2]。本研究对日本旭化成GA测定试剂盒主要分析性能进行了评价，同时对其室内质控性能进行了评价，现将结果报道如下。
1 对象和方法
1.1 研究对象
标本来源于2020年1—11月在我院住院、门诊患者或健康体检者。随机选择健康体检人群中既往无糖尿病、高血压、血脂异常、冠心病及卒中病史，BMI为18.5～24.9且肝肾功能、血常规、尿常规等结果正常的表观健康人，男10名，女10名，年龄18～60岁。
1.2 仪器和试剂
仪器为西门子全自动生化分析仪，型号ADVIA2400。试剂为日本旭化成制药株式会社生产的Lucica GA-L糖化白蛋白测定试剂盒，配套校准品和质控品(试剂批号：1805A;校准品批号：1805A/1807A;质控品批号：1805A)。实验前严格按照厂家操作规程进行仪器的维护保养和校准，以确保仪器处于良好的状态。
1.3 方法
1.3.1 精密度评价：
参考CLSI EP15-A2文件[3],选取2份不同浓度的新鲜血清标本，GA浓度分别约为0.627g/dl和1.689g/dl, 每天分析一批，每批重复测定3次，连续测定5d。
1.3.2 正确度评价：
参考CLSI EP15-A2文件[3],使用厂商提供的另一个批号校准品(1807A)进行正确度验证实验，测定校准品3次，取均值，然后与配套校准品的标示值比较，计算偏倚。
1.3.3 分析测量范围(AMR)实验：
参考CLSI EP6-A文件[4],收集GA的高值血清样本，用生理盐水稀释高值血清，按体积比1L、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、1H,配成6个浓度梯度的血清，并对各浓度梯度血清测定2次，计算平均值，在1个分析批次内完成。线性范围评价血清：高值患者血清GA浓度3.50g/dl, 白蛋白浓度4.85g/dl。
1.3.4 临床可报告范围(CRR)实验：
参照试剂说明书，进行稀释回收试验。选择3份高值标本，用生理盐水对标本进行稀释，检测结果与稀释后的预期值比较，计算稀释回收率。
1.3.5 生物参考区间验证：
参考CLSI C28-A2文件，测定健康体检人群GA浓度，验证是否与厂家声明的参考区间一致。
1.3.6 室内质控性能评价实验：
功效函数图是一种为分析批失控概率(误差检出概率和假失控概率) 与该批发生随机或系统误差大小关系的图，即表示统计功效与分析误差大小(ΔSEc 和 ΔREc) 的关系，则可筛选出更适合于每个不同试验指标的质控方法，并能够预测质控方法可否达到预想的质量目标[5-6]。以室内质控的累积变异系数(CV)作为项目的不精密度，以全球室内质控室间比对同方法学组的均值为靶值计算偏倚(Bias),选择10%为总允许误差，借助操作过程规范图和西格玛度量图设计室内质控方法[7]。
1.4 统计学方法
应用Microsoft Excel 2003和伯乐质控管理系统Unity Real Time进行统计分析，线性回归采用简单线性回归分析。
2 结果
2.1 精密度实验
西门子全自动生化分析仪ADVIA2400采用液态酶法检测不同浓度的新鲜血清标本，批内精密度和总不精密度均小于厂家声明的批内和总不精密度，已核实批内精密度与总不精密度与厂家声明的一致，结果可以接受，详见表1。
表1 GA精密度评价实验结果
2.2 正确度实验
检测与当前检测系统校准的校准品不同批号的配套校准品，测定值分别为1.619、1.629、1.623,取其均值1.624g/dl, 校准品标识值1.63g/dl, 计算二者的相对偏倚为-0.37%,<5%(1/2允许总误差),正确度性能得到验证。
2.3 分析测量范围实验(AMR)
GA的预期值和实测值无明显离群值，最佳拟合方程为一次多项式。回归方程Y=0.990X+0.010,R2为0.999,见图1。直线回归结果得知：相关系数为0.999,在0.97～1.03之间，斜率为0.990,与1之间无显著差异；截距为0.010,与0之间无显著差异。说明预期值与测量值之间相关性极好，该方法在实验所涉及的浓度范围内(0～3.50g/dl)成线性，与厂商提供的线性范围0.0～3.60g/dl相符。
图1 GA分析测量范围验证试验
2.4 临床可报告范围(CRR)
标本经过稀释后，确定最大稀释倍数为10,回收率均落在90%～110%的最大稀释倍数，故其可报告的临床范围(CRR)是：0～36g/dl, 可以满足临床的需求，见表2。
表2 GA稀释回收率测定结果
2.5 生物参考区间验证
20名健康个体GA检测结果：0.44～0.65g/dl, ALB-GA检测结果：4.4～5.1g/dl, 均在厂家提供的参考区间内。
2.6 室内质控性能评价实验
操作过程规范图(见图2)和西格玛度量图(见图3),可见GA每天测定质控品个数2,选择1-5S单质控规则即可满足Ped>90,Pfr<5,西格玛为7.5。
图2 GA操作过程规范图
图3 GA西格玛度量图
3 讨论
GA作为一种新的糖尿病诊断监测新指标，它在多种病理状态下能更可靠地反映血糖控制的真实水平，这对病情的评估、疗效的评价和预后的判断具有极其重要的临床意义[1-2],其联合其他指标对临床的诊断意义更大[8-9]。GA的检测方法有很多，包括阳离子交换层析法、电泳法、亲和层析法和免疫学方法等，这些方法虽然较灵敏，但设备要求高、代价高昂、操作烦琐等。目前认为液态酶法检测GA具有简便、特异性高、微量、快速等特点，更适于实验室推广应用[10]。
本研究参考CLSI-EP文件和相关文献，并结合本实验室的实际情况，评价西门子全自动生化分析仪ADVIA2400酶法检测GA的分析性能[3-4]。主要对酶法测定GA的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围以及参考区间验证等分析性能指标进行了评价。结果显示：该法的精密度良好，GA浓度为0.627g/dl和1.689g/dl时批内精密度和总的精密度，均低于基于生物学变异的精密度(CV<2.6%),也低于厂家提供的近似浓度的精密度(CV<3%)。正确度验证采用日本旭化成公司提供的另一批号校准品，其校准物质具有可靠的溯源性，相对偏倚为-0.37%,<1/2的总允许误差，正确度得到验证。分析测量范围(AMR)是收集无黄疸、脂血和溶血高值新鲜患者标本进行分析验证，GA在0～3.5g/dl范围内存在线性关系，该结果显示仪器测定的线性范围在厂家提供的范围内，涵盖了医学决定水平。说明书声明的稀释回收率为90%～110%,三份高值样本当稀释度达1∶9时，回收率在可接受范围内，确定最大稀释度为1∶9,AMR上限乘以最大稀释度即为临床可报告范围(CRR)上限，为36g/dl, 结合功能灵敏度为0U/L,故本检测系统测定GA的临床可报告范围为0～36g/dl。当患者标本测定结果高于AMR上限时，必须稀释后重测，但不能超过最大稀释倍数，稀释后测定值必须大于测量低限，否则结果不可靠。对厂家提供的生物参考区间进行验证，20个结果均在其范围内，说明该范围有效，可用于本实验室。
功效函数图验证候选质控规则的性能特征Y 轴为误差检出率(Ped),X 轴为临界误差大小，Y 轴的截距则为假失控率(Pfr)。确定 Ped和 Pfr 后，确定质控方案，即质控规则及控制测定个数[5-6]。结合操作过程规范图和西格玛度量图设计符合的室内质控方法，从而提高误差检出概率(Ped),降低假失控概率(Pfr)。本研究借助伯乐全球室内质控软件利用室内质控数据进行分析，以2020年1—11月的GA室内质控(L、H)的累积变异系数(CV)作为项目的不精密度，以全球室内质控室间比对同方法学组的均值为靶值计算偏倚，选择10%为总允许误差，得出该项目的操作过程规范图和西格玛度量图。本研究发现，GA每天测定质控品个数2,选择1-5S单质控规则即可满足Ped>90,Pfr<5,西格玛为7.5。
综上所述，西门子全自动生化分析ADVIA2400酶法检测GA的主要分析性能基本满足临床实验室要求，室内质控性能佳，可为实验室提供可靠的结果，值得应用。
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