万明香1 张丽艳2 何顺志2*
1.贵阳中医学院第一附属医院，贵州贵阳550001；2.贵阳中医学院药学系，贵州贵阳550002
基金项目：国家中医药管理局科技项目（编号04-05zp59）。
作者简介：万明香（1980-），女，研究生，侗族，主管药师，主要从事中药资源调查与中药质量控制。
通信作者：何顺志，教授。E-mail：hesz8899@126.com
【摘要】目的：研究黔产八角莲属药材不同种质资源间总黄酮含量的差异。方法：用紫外分光光度法测定四份八角莲属药材种质资源根、茎和叶的总黄酮含量。结果：黔产八角莲属药材种质资源间总黄酮含量的差异较大。川八角莲的总黄酮含量最高，为2.64%；贵州八角莲次之；八角莲样品的最低，仅有1.03%；八角莲属药材不同部位中总黄酮含量高低的分布规律为根＞叶＞茎。结论：川八角莲根样品的总黄酮含量最高，可作为人工栽培时的原种利用，研究结果为川八角莲的种质资源筛选和人工栽培提供了试验依据。
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关键词 贵州；八角莲属；种质资源；总黄酮含量
【中图分类号】R284【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2015)03-0016-02
黔产八角莲属药材主要为八角莲［Dysosmaversipellis(Hance)M.ChengexYing］、贵州八角莲［D.majorensis(Gagnep.)Ying］、川八角莲［D.veitchii(Hemsl.etWils.)FuexYing］和小八角莲［D.difformis(Hemsl.etWils.)T.H.WangexYing］。具化痰散结、祛瘀止痛、清热解毒的功效，主要用于咳嗽、咽喉肿痛、瘰疬、疔疮、毒蛇咬伤、跌打损伤等证［1-5］。特别用于治疗食道癌、子宫癌。化学成分研究发现其根和根茎中含有抗癌成份鬼臼毒素、脱氧鬼臼毒素、金丝桃苷、槲皮素等，具有极其广阔的开发前景。
近年来，由于八角莲属药材显著的药用价值而遭到人为严重破坏，导致该属植物数量日趋减少。其中，八角莲Dysosmaversipellis为濒危植物，在第一批国家珍稀濒危保护植物名录中被列为三级保护植物。八角莲属药材通常以根入药，而大量的茎叶没有得到充分利用，因此有必要对八角莲属药材地上部分与地下部分总黄酮含量进行对比研究，以期为充分利用八角莲属药材自然资源提供科学依据
1材料与方法
1.1材料
1.1.1研究材料主要对贵州龙里、荔波、贞丰和赫章等县市的八角莲属药材资源进行了野外考察和样品收集，收集的八角莲属药材样品由贵阳中医学院生药教研室何顺志教授鉴定，分别为贵州八角莲Dysosmamajorensis(Gagnep.)Ying、八角莲D.versipellis(Hance)M.ChengexYing、小八角莲D.difformis(Hemsl.etWils.)T.H.WangexYing和川八角莲D.veitchii(Hemsl.etWils.)FuexYing。
1.1.2仪器岛津UV-2501PC分光光度计；FA2004分析天平；植物粉碎机，均购自上海精科公司。
1.1.3试剂芦丁（批号0080-9705，中国药品生物制品检定所），其余试剂均为分析纯。
1.2八角莲属药材总黄酮含量的测定
1.2.1最大吸收波长的选择［6］将标准品溶液和样品溶液以60%乙醇、0.1mol/L三氯化铝溶液、0.1mol/L醋酸钾溶液为显色剂，以试剂为空白对照，在250nm～500nm进行扫描，结果显示标准品溶液和样品溶液在417nm处均有最大吸收，故选定417nm为测定波长。
1.2.2对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品3.57mg，置于25ml容量瓶中，加60%的乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液（142.8μg/ml）。
1.2.3线性关系精密吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml芦丁对照品溶液分别置于25ml容量瓶中，加60%乙醇至5.0ml，再分别加入3.0ml的0.1mol/L三氯化铝溶液，5.0ml的0.1mol/L醋酸钾溶液，加60%乙醇至刻度，摇匀，放置40min。以第1份作空白，在417nm测定吸光度。并以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：y=31.863x+0.0104；r=0.9999。结果表明，芦丁在0.14mg~0.71mg范围内含量与吸光度有良好的线形关系。
1.2.4精密度试验取对照品溶液3ml，按照标准曲线项下测定方法，重复测定5次，结果得以芦丁计的总黄酮的RSD为0.10%。
1.2.5重复性试验精密称取贵州八角莲样品0.5g，共5份，按样品测定方法进行测定，结果得以芦丁计的总黄酮平均含量RSD为2.84%
1.2.6稳定性试验精密称取同一批样品0.5g，按样品测定方法进行测定，显色40min后，每隔20min测定1次，持续80min，总黄酮平均含量的RSD为2.66%，表明显色40min后，80min内测定基本稳定。
1.2.7加样回收率试验精密称取已知含量的贵州八角莲样品0.25g，平行6份，含量为2.43%，分别精密加入芦丁对照品溶液，按样品测定项下方法测定，计算回收率，结果见表1。
1.2.8样品测定精密称取样品（过40目筛）约0.5g，加氯仿适量索氏提取至无色，弃去氯仿液，挥干，加甲醇适量索氏提取至无色，回收甲醇并定量转移至50ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为供试品溶液，取供试品溶液自“加60%乙醇至5.0ml”起，按标准曲线操作方法进行测定。按下式计算总黄酮含量。
2结果与分析
2.1贵州八角莲属药材资源现状根据贵州的地理环境和气候特点确定黔东南、黔西、黔北、黔南4条调查路线并选择施秉、荔波、遵义、龙里、贞丰和赫章等具有代表性的地区进行调查，实地调查结果表明，八角莲属植物中八角莲主要分布于黔东南的施秉九龙山、云台山，遵义的金鼎山、娄山关，黔南的荔波、三都、独山、平塘等地；贵州八角莲主要分布于龙里、遵义、道真、桐梓等地；小八角莲主要分布于黔西南的安龙仙鹤坪自然保护区、贞丰龙头大山等地；川八角莲分布于纳雍唇仁、赫章韭菜坪等地。在贵州八角莲属植物中四种药用植物资源蕴藏量大小为：八角莲>贵州八角莲>小八角莲>川八角莲。但过度采挖、全民药用资源保护意识和法制观念薄弱、毁林开荒、过度放牧以及城市建设破坏了生态环境和资源分布，导致八角莲属植物的蕴藏量很少，需要重点保护。
2.2不同产地及不同部位八角莲属药材总黄酮含量的种质资源差异
2.2.1不同来源八角莲属药材总黄酮含量由表2可知，川八角莲总黄酮含量最高，为2.64%，贵州八角莲其次，八角莲总黄酮含量最低；总黄酮含量从高到低分别为：赫章川八角莲＞龙里贵州八角莲＞贞丰小八角莲＞荔波八角莲。
2.2.2贵州产八角莲属药材不同部位的总黄酮含量差异同样由表2可知，总黄酮含量为：根＞叶＞茎。
3讨论
对采自贵州各县市八角莲属药材种质资源总黄酮含量的测定结果表明，八角莲属药材种质资源间总黄酮含量差异较大，以赫章川八角莲的种质资源最好，荔波八角莲的种质资源最差，因此在该区进行人工栽培时可直接利用赫章川八角莲为种质来源。
对八角莲属药材不同部位总黄酮的测定结果表明，八角莲属药材总黄酮有效成分含量在根中含量最高，叶次之，茎最低。通常八角莲属药材是以根入药，由于八角莲属植物地下部分，生长缓慢，根茎呈结节状，一年长一节，数年才能入药用，而地上部分每年均可采收。因此从总黄酮成分和资源的保护、合理利用及可持续发展的角度出发，利用地上部分为好，可使八角莲属药材资源实现可持续利用和发展。
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参考文献
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［2］雷震，杨光义，叶方，等．UPLC法测定八角莲药材中鬼臼毒素的含量［J］．中国药师，2013，16(4)：548-519．
［3］蒋向辉，余朝文．侗药八角莲药用民族植物学研究［J］．中国民族医药杂志，2011，17(10)：44-46．
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(收稿日期：2014.11.03)