肖辉1 李柯2* 黄爱群3 陈立峰2 徐琳本2 李若存2
1.湖南省中医药大学附属第一医院，湖南长沙410007；
2.湖南省中医药研究院，湖南长沙410013；
3.广东省江门市蓬江区白石正骨医院，广东江门529000
作者简介：肖辉，主管药师，主要从事中药新制剂的研究。
通信作者：李柯，助理研究员，主要从事中药制剂与质量控制的研究。Ｅ-mail：17848689@qq.com
【摘要】目的：研究久积膏的抗炎、镇痛作用。方法：采用大鼠佐剂性关节炎模型、大鼠角叉菜胶足跖肿胀模型、小鼠耳廓炎症模型及小鼠热板镇痛模型，60只SD大鼠分成6组：对照组、模型组、久积膏低、中、高剂量组（0.144g/g、0.287g/g、0.430g/g）及吲哚美辛组（0.01g/g），进行久积膏抗炎镇痛作用研究。结果：与模型组比较，久积膏低、中剂量组能使佐剂性关节炎大鼠体重明显增加（P＜0.01）；低、中剂量组对佐剂性关节炎大鼠原发病变和继发病变足跖肿胀率有明显抑制作用（P＜0.01）；高剂量组能明显抑制角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀性炎症反应（P＜0.01）；中、高剂量组能明显抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀性炎症反应（P＜0.01）；高剂量组能提高小鼠对热刺激阈值（P＜0.01）。结论：久积膏具有明显的抗炎、镇痛作用。
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关键词 久积膏；药效学；抗炎；镇痛
【中图分类号】R285.5【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2015)03-0013-03
久积膏为广东省江门市蓬江区白石正骨医院开发的一种医院外用皮肤药，具有祛湿散寒、活络舒筋、行瘀止痛的功效，临床用于关节肿痛、筋骨不利、寒湿瘀聚等症。为了验证其抗炎镇痛的功效，采用大鼠佐剂性关节炎模型、大鼠角叉菜胶足跖肿胀模型、小鼠耳廓炎症模型及小鼠热板镇痛模型，观察不同剂量久积膏抗炎和止痛作用，为久积膏的临床应用提供实验依据。
1材料
1.1药品与试剂久积膏（批号：20070612，相当于生药量为0.574g/g，由湖南省中医药研究院中药制剂研究室提供），其他生药量久积膏用对照膏稀释。对照膏为久积膏基质，不含生药（批号：20070612，由湖南省中医药研究院中药制剂研究室提供）；吲哚美辛片（批号：A070102，山西云鹏制药有限公司），用对照膏配制成吲哚美辛含量为0.01g/g；氯化钠注射液（批号：070320502，武汉滨湖双鹤药业有限责任公司）；Freund′s完全佐剂（批号：016K8900，SIGMA公司）；角叉菜（批号：c-4014，sigma公司）；二甲苯（批号：20040518，湖南师大化学试剂厂）。
1.2动物SD大鼠和ICR小鼠，均为SPF级，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，生产许可证号为SCXK(沪)2003-0002，合格证号大鼠为：0027946，0027947；小鼠为0028201。鼠用全价颗粒饲料由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。
2方法与结果
2.1统计分析方法统计学资料采用spss17.0软件进行统计处理。计量资料数据用（x±SD）表示，用方差分析或者t检验判断组间差异有统计学意义；计数资料数据用Fisher′s精确概率检验判断组间差异有统计学意义。P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.01表示所检验的差异有高度统计学意义。
2.2久积膏对大鼠佐剂性关节炎（adjuvantarthritia，AA）模型的影响［1］
2.2.1试验方法取SD大鼠60只，体重(195±10)g，雄性，按体重分层将动物随机分为6组，用游标卡尺测左、右后足跖厚度后，参照文献方法［1］，取其中5组动物，右后足跖皮内注射Freund′s完全佐剂0.05ml致炎；另1组右后足跖皮内注射氯化钠注射液0.05ml作为对照；致炎约18h后和第8天、第28天再用游标卡尺测左、右后足跖厚度；每周称体重1次。致炎第8天开始给药，对照组和模型组给对照膏，其他组分别给久积膏(低、中、高含量)0.144、0.287、0.430g/g和吲哚美辛0.010g/g，给药膏量为1g/kg，涂于右侧足跖，每天1次，给药3周。观察指标：计算致炎18h、第8天和第28天左、右后足跖肿胀率和肿胀抑制率。肿胀率(%)=(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100%，肿胀抑制率(%)=(对照组肿胀度-给药组肿胀度)/对照组肿胀度×100%
2.2.2久积膏对佐剂性关节炎大鼠体重的影响与对照组比较，从第2周开始，佐剂性关节炎大鼠体重明显减轻，持续到第4周试验结束。与模型组比较，久积膏0.144（P<0.01）、0.287（P<0.01）、0.430g/g（P<0.05）给药2周时大鼠体重明显回升，差异都有统计学意义，给药3周时体重达到对照组水平；吲哚美辛0.010g/g也能使大鼠体重回升，但作用弱于久积膏，见表1。
2.2.3久积膏对佐剂性关节炎大鼠原发病变的影响与对照组比较，大鼠足跖注射Freund′s完全佐剂致炎后18h开始，原发病变足跖明显肿胀；持续到第4周试验结束时肿胀稍微减轻。与模型组比较，久积膏0.287、0.430g/g给药3周(致炎后第4周)对佐剂性关节炎大鼠原发病变足跖肿胀率都有降低，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.2.4久积膏对佐剂性关节炎大鼠继发病变的影响与对照组比较，模型组大鼠足跖注射Freund′s完全佐剂致炎后4周，大鼠继发病变足跖（对照足跖）出现明显肿胀（P<0.01）。与模型组比较，久积膏0.144、0.287g/g和吲哚美辛0.010g/g对佐剂性关节炎大鼠继发病变足跖肿胀显著降低，差异有高度统计学意义（P<0.01）。见表3。
2.3久积膏对大鼠角叉菜胶足跖肿胀的影响［2］取SD大鼠60只，体重(159±7)g，雄性，按性别体重分层随机分为6组，对照组和模型组给对照膏，其他组分别给久积膏（低、中、高含量）0.144、0.287、0.430g/g和吲哚美辛0.01g/g，给药膏量为1g/kg，涂于右侧足跖，每天1次，给药5d。末次给药同时除对照组大鼠右后足跖皮内注射氯化钠注射液0.1ml外，其他组大鼠右后足跖皮内注射1%角叉菜胶0.1ml；末次给药前和给药后2、4、6h分别用游标卡尺测右后足跖厚度，计算足跖肿胀度和肿胀抑制率。肿胀（mm）=致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度，肿胀率（%）=（致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度）/致炎前足跖厚度×100%，肿胀抑制率（%）=（模型组肿胀度-给药组肿胀度）/模型组肿胀度×100%。
与对照组比较，大鼠右后足跖注射角叉菜胶后出现明显肿胀，肿胀持续6h未见明显消退。与模型组比较，久积膏0.430g/g和吲哚美辛0.01g/g对角叉菜胶所致炎后4h足跖肿胀有降低，差异有高度统计学意义（P<0.01）；久积膏0.287g/g对角叉菜胶致炎后6h足跖肿胀有降低，差异有高度统计学意义（P<0.01）。见表4。
2.4久积膏对小鼠耳廓炎症模型试验［3］ICR小鼠60只，体重(19.5±1.2)g，雄性，按体重分层随机分为6组，对照组和模型组给对照膏，其他分别给久积膏（低、中、高含量）0.144、0.287、0.430g/g和吲哚美辛0.010g/g，给药膏量为5g/kg，涂于双侧耳廓，每天1次，给药5d。末次给药后30min除对照组小鼠右耳廓2面各涂水0.01ml外，其他组小鼠右耳廓2面各涂二甲苯0.01ml；涂二甲苯后1h颈椎脱臼处死小鼠，剪下双耳，用9mm打孔器在相应部位分别打下圆耳片，电子天平称重，计算耳廓肿胀度和肿胀抑制率。肿胀度(mg)=右耳片重-左耳片重，肿胀率(%)=(右耳片重-左耳片重)/左耳片重×100%，抑制率(%)=(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%
与对照组比较，小鼠右耳廓涂二甲苯1h后出现明显肿胀。与模型组比较，久积膏0.287、0.430g/g和吲哚美辛0.010g/g能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，差异有高度统计学意义（P<0.01）。见表5。
2.5久积膏对小鼠热板镇痛试验的影响［4］取ICR小鼠，体重(19.0±1.2)g，雌性，热板法（55.0±0.1）℃测痛阈值。取痛阈值范围为>5s和<30s的小鼠50只，按痛阈值分层随机分为5组，对照组给对照膏，其他组分别给久积膏（低、中、高含量）0.144、0.287、0.430g/g和吲哚美辛0.010g/g，给药膏量为5g/kg，涂于双后足跖，每天1次，给药5d。末次给药后2、4h分别用热板法测痛阈值，计算痛阈变化率；以痛阈达60s或基础痛阈值的2倍判断为有镇痛作用，计算镇痛率。
与模型组比较，久积膏0.144、0.287和0.430g/g给药后2h使小鼠热板痛阈值开始增加，4h时痛阈值增加显著。按镇痛作用标准分析，模型组给对照膏无镇痛作用；久积膏0.430g/g和吲哚美辛0.010g/g镇痛率分别为40%和50%，差异有高度统计学意义（P<0.01）。见表6。
3讨论
类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）是一种以关节滑膜慢性炎症为主要特征的系统性自身免疫病，是一种原因不详、发病率及致残率均较高，并且尚无特效药物治疗的常见病症［5］。现代医学研究对治疗类风湿性关节炎的药理作用主要包括免疫抑制、抗炎、镇痛以及对骨关节的影响。本研究选用Freund′s完全佐剂成功复制AA大鼠模型，试验动物均出现了体重减轻、继发性和原发性的关节肿胀炎症；实验结果证实久积膏能使佐剂性关节炎大鼠体重明显增加，对原发病变足跖肿胀和继发病变足跖肿胀有治疗作用。角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型、二甲苯所致小鼠耳廓炎症模型属于急性非特异性炎症模型和免疫性炎症模型，主要表现为局部的充血、水肿及渗出等病理反应过程，常用于评价药物对急性炎症过程的影响［6］。结果表明久积膏能明显抑制角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀性炎症反应和二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀性炎症反应，该实验结果进一步从抗炎方面佐证了久积膏临床治疗类风湿性关节炎。研究镇痛药的效价，主要测定对其痛阈的影响。久积膏能延长小鼠热板痛反应时间，提高痛阈值，并与给药剂量呈正相关，其实验研究结果与久积膏临床镇痛效果是一致的。
久积膏是广东省江门市蓬江区白石正骨医院李焯文家族治疗寒湿痹阻型类风湿性关节炎的有效良方。方中白芥子辛温利气豁痰，散寒开结，化皮里膜外之凝痰；羌活、独活发散周身之风寒湿邪，舒利关节而止痹痛，三者共为君药。生半夏、生南星相须为用，驱散经络中之风痰湿浊；川乌、草乌祛风散寒，除湿通痹之功，且尤擅止痛；乳香新散温通既能活血化瘀，又能行气散滞；桂枝味甘和缓，可发汗；荆芥、防风为解表平和之药，同用发汗解表，开泄皮毛，使风寒之邪外达而解，上药合用共为臣药。佐以石菖蒲芳香化湿，醒脾行气；丁香辛温而温中散寒行气止痛；白芷通经理气能散风除湿止痛；为防止方中辛热行气之药动血致血液离经之虞，使以具有收敛之性的五倍子收涩解毒消肿；白蔹、白芨消肿散结止痛。三药均有收敛之性可使血活瘀散而不至于太过。全方配伍寒温并用，痰瘀并治，具有温经通络，化湿、化痰、化瘀的功效、使寒散、湿化、痰消、瘀祛而治疗RA。
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参考文献
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［5］中华医学会风湿病分会．类风湿关节炎诊断及治疗指南［J］．中华风湿病学杂志，2010，14(4)：265．
［6］魏伟，吴希美，李元健．药理实验方法学［M］．4版.北京：人民卫生出版社．2010：742．
(收稿日期：2014.10.31)