臧希卉
吉林省疾病预防控制中心消毒所，吉林长春 130000
[摘要] 目的 分析和研究HIV感染者CD4+T淋巴细胞凋亡率和计数以之间的相互关系。方法 选取HIV感染组和正常人群组各45例，采用流式细胞术的方法来检测两组人群外周血中CD4+T淋巴细胞的凋亡率和HIV感染组的CD4+T淋巴细胞的计数，然后分析二者之间的相互关系。结果HIV感染组CD4+T淋巴细胞的凋亡率是(6.81±2.29)%，要远高于对照组的凋亡率(2.76±0.88）%，该两组CD4+T淋巴细胞的凋亡率对比，具有显著的差异（P＜0.01），具有统计学意义。本研究组细胞计数个数平均值为（362.5±6.3）, 和HIV感染组CD4+T淋巴细胞的凋亡率之间存在明显负相关关系（P＜0.01）。结论 HIV感染患者的CD4+T淋巴细胞总量的减少和细胞的凋亡率存在着密切的关系，所以检测HIV感染者CD4+T的淋巴细胞凋亡率，更有利于判断患者的疾病发展进程状况。
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关键词 ] HIV感染；CD4+T淋巴细胞；细胞凋亡
[中图分类号] R512.91 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）05（a）-0105-02
相关研究证明，人免疫缺陷病毒(HIV)感染后，会逐渐耗竭在免疫系统调节中起着重要作用的CD4+T淋巴细胞，最终会导致获得性免疫缺陷综合症AIDS (即艾滋病)[1]。多年来，大量的研究在于观察CD4+T淋巴细胞的凋亡在HIV/AIDS的发病机理中所起到的重要作用，但是很少有研究表达CD4+T淋巴细胞凋亡率和CD4+T淋巴细胞计数之间的关联性。本项试验通过流式细胞术来研究HIV感染患者CD4+T淋巴细胞的凋亡状况，并探讨和分析该指标和CD4+T淋巴细胞计数的相互关系，取得了较好的结果，现进行如下报道。
1对象与方法
1.1研究对象
收集45例患HIV的感染者，都是经过性传播途径而被感染，均采用蛋白印迹方法经确诊属于HIV-1，患者年龄从19~40岁，平均的年龄是（26.1±3.7）岁，其中男性患者共25例，女性患者共20例，没有使用过抗HIV的治疗，排除没有其它症状的感染者；另外选取45例和HIV感染类似的HIV阴性志愿者来作为对照组进行比较。
1.2检测方法
采用FITC标记CD4单抗和溶血素以及Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒，对于CD4+T淋巴细胞计数采用和50 μL抗凝血混合均匀，在室温避光保存15 min后,加入450uL溶血素, 再在室温避光保存15 min后，通过FACS MULISET软件进行检测并分析对比研究。CD4+T淋巴细胞凋亡的检测方法是：用200 μL抗凝全血加溶血素后，马上轻轻混匀，在室温避光保存15 min以后，离心5 min去上清，在4 ℃条件下，PBS (pH值为7.2, 0.01 mol/L)对细胞洗涤2次，然后采用FACS CELLQUEST软件进行检测和分析。
1.3统计学原理
所有的资料采用spss 18.0的统计学软件进行综合分析实验结果，HIV感染者和对照组患CD4+T淋巴细胞的凋亡率之间对比采用秩和进行检验；两组间计数资料相关性采用是Spearman等级相关分析。如果P＜0.05，表明其差异具有统计学意义。
2结果
HIV感染组CD4+T淋巴细胞的凋亡率是(6.81±2.29)%，要远高于对照组的凋亡率(2.76±0.88）%，该两组CD4+T淋巴细胞的凋亡率对比，具有显著的差异（Z=-5.391，P<0.01），具有统计学意义。本研究组细胞计数个数平均值为（362.5±6.3）, 和HIV感染组CD4+T淋巴细胞的凋亡率之间存在明显负相关关系（r=-0.875，P<0.01）。
3讨论
在临床上HIV感染者有个很明显的特征是：CD4+T淋巴细胞的数量如果有进行性的下降，就会伴随着细胞功能的快速下降[2]。Ledru E等[3-4]相关研究证明，感染者的体内外HIV感染以后所导致的细胞凋亡，极有可能是CD4+T淋巴细胞出现进行性减少的一个非常重要的原因。CD4+T淋巴细胞出现进行性减少机制通常和下面两个因素密切相关：①HIV编码的蛋白，比如Tat蛋白等，常以抗原与超抗原的形式对于机体免疫细胞进行反复的刺激，造成慢性免疫活化状况，并经过活化引发细胞死亡与活化T细胞自主死亡的机制，来加速CD4+T细胞量的减少；②促凋亡蛋白通过TNF受体细胞凋亡与线粒体细胞凋亡两个信息途径，诱发T淋巴细胞的凋亡，结果造成了CD4+T淋巴细胞的大幅减少[5]。Herbein等相关研究[6]证明，HIV不但会造成被感染CD4+T细胞的凋亡，并且还会导致没受感染的旁观者T淋巴细胞的凋亡数目急剧增加。由于凋亡做为机体的自我保护功能，在自动清除感染细胞的同时，却并未能够抑制HIV于单核/巨噬细胞内的复制，最终导致没有受到感染的细胞同样出现死亡，造成对于HIV细胞复制出现失控状态，进而发展成出现严重的免疫缺陷，引发AIDS等相关的机会性的感染。当人体全血中CD4+T淋巴细胞的水平在降至200个/μL以下的时候，就非常容易引起各类机会感染，这也是HIV感染患者最大的威胁[7]。
通过本次研究的结果证明：HIV感染组CD4+T淋巴细胞的凋亡率要远高于对照组的凋亡率，该两组CD4+T淋巴细胞的凋亡率对比，差异具有统计学意义。此外，本研究组细胞计数个数平均值为（362.5±6.3）, 和HIV感染组CD4+T淋巴细胞的凋亡率之间存在明显负相关关系，这和成浩等[8]有关文献报道比较一致。所以，对于HIV感染患者的疾病进程的监测，除了应当监控传统的CD4+T淋细胞的计数与病毒载量，还应当检测出细胞的凋亡率，今后在实施艾滋病的治疗和新药的研制开发时，还应当把细胞的凋亡率的改变作为治疗效果的重要观察指标进行参考。
综上所述，CD4+T淋巴细胞的凋亡率增加属于HIV感染者CD4+T淋巴细胞计数出现降低的主要原因，HIV感染患者的CD4+T淋巴细胞量的减少和细胞的凋亡率存在着密切的关系，所以检测HIV感染者的CD4+T的淋巴细胞凋亡率，更有利于判断患者的疾病发展进程。
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参考文献]
[1] 饶和平,吴南屏,冯磊,等.HIV感染者第二受体CCR5和CXCR4表达与机会性感染的相关性[J].解放军预防医学杂志，2009, 12(4):105.
[2] 代娣，尚红，姜拥军，等.我国HIV/AIDS患者外周细胞凋亡与疾病进展的相关性分析[J].中国免疫学杂志，2006, 22 (12):1156-1157.
[3] Ledru E, Lecoeur H, Garcua S, et al. Differential susceptibility to activation-induced apoptosis among peripheral Th1subsers:corre-lation with Bcl-2expression and consequences for AIDS pathgene-sis.[J] Immunol， 2008, 20(5): 957-958.
[4] 王晔恺,曾芳,周吉航,等.CD8~+T淋巴细胞各亚群与HIV感染疾病进程的关系[J].中国皮肤性病学杂志，2010(9):818-820.
[5] 陈小平,陈观今,肖斌权，等. HIV/AIDS患者和正常人T细胞亚群、农型及其相关性的比较研究[J].中国人兽共患病杂志，2009,17(2):175.
[6] Herbein G,Lint C V,Lovett J L, et al. Distinct mechanism trigger apoptosis in human immunodeficiency virus type1infected and in un-infected bystander T lymphocytes[J]. Journal of Virology，2011, 16(7)1387-1389.
[7] Rowland-Jones SL.Timeline: AIDS pathogenesis: what have two decades of HIV research taught us[J]. Nature Reviews Immunolog，2013,3(4):343-348.
[8] 成浩,徐金水,吴建茹,等.江苏省男性HIV感染者/艾滋病人中解脲脲原体和生殖支原体的检测分析[J].南京医科大学学报:自然科学版，2010,16(8):191-192.
（收稿日期：2014-02-10）