王益华1 俞俊萍1 来丽丽2
1.杭州民生滨江制药有限公司，浙江杭州 310000；2.浙江中医药大学生物工程学院，浙江杭州 310053
[摘要] 目的 探讨孟鲁司特钠片降解产物的测定方法，以有效控制药品的质量。方法 采用用高效液相色谱法测定孟鲁司特钠片降解产物，Agilent ZORBAX XDB C8色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B梯度洗脱，流速1.2mL/min，检测波长为254nm，采用杂质对照品法测定降解产物。结果 孟鲁司特钠浓度在1.035 648~6.213 888μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，主药与降解产物能达到较好的基线分离。结论 该方法灵敏度高，专属性强，准确可靠，可用于药品控制。
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关键词 高效液相色谱法；孟鲁司特钠；降解产物
[中图分类号] R9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)03(b)-0023-02
Study on HPLC for the Determination of Montelukast Sodium Tablets Degradation Products
WANG Yihua YU Junping1 LAI Lili
1. Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Group Co., Ltd, Hangzhou, 310051, Zhejiang Province, China;
2. College of Bioengineering, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou, Zhejiang Province, 310053, China
[Abstract] Objective To investigate a method for the determination of montelukast sodium tablets degradation products, in order to effectively control the quality of drugs. Methods HPLC for determination of montelukast sodium tablets degradation product, Agilent ZORBAX XDB C8 column (4.6 × 250mm, 5 μ m), phosphate buffer as mobile phase A, acetonitrile as mobile phase B gradient elution, flow rate 1.2ml/min, the detection wavelength was 254nm, the impurity determination of degradation products in the control sample method. Results Montelukast sodium concentration in the range of 1.035648-6.213888 μg/ml had a good linear relationship with peak area, the main drug and degradation products can achieve good baseline separation. Conclusion This method is of high sensitivity, strong specificity, accurate and reliable, and can be used for drug control.
[Key words] HPLC; Montelukast sodium; Degradation products
[作者简介] 王益华(1985.10-),男,浙江衢州人,本科,助理工程师,研究方向:药物分析,邮箱:wyihua@mspharm.com。
[通讯作者] 来丽丽(1985.8-),女,浙江杭州人,本科,助理研究员,研究方向:提取分离,邮箱：lailili85@163.com。
孟鲁司特钠化学名为[R-(E)]-1-[[[1-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-羟基-1-甲基乙基)苯基]丙基]硫代]甲基]环丙基乙酸钠，为选择性白三烯D4受体拮抗剂[1]，可与气道中的白三烯选择性地结合，阻断过敏介质的作用，改善呼吸道炎症[2]，使气道畅通，是一种高效、低毒、安全性好的平喘抗炎和抗过敏药[3]。该实验于2012年9月—2013年3月完成，采用高效液相色谱法测定孟鲁司特钠片的降解产物，以期为质量控制提供可靠的实验依据,现报道如下。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪(型号：Waters2695-2489，厂家：美国Waters公司)、紫外检测器(型号：TU-1900，厂家：北京普析通用公司)、孟鲁司特钠对照品(批号F089F11015)、孟鲁司特钠峰鉴别用对照品(批号20120216)、杂质A对照品(批号F0891MPE333R009)、杂质C对照品(批号F0891MPB259R055)、杂质D对照品(批号F0891MPD277R099)均由企业提供，孟鲁司特钠片(批号：120312)，乙腈和甲醇均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱Agilent ZORBAX XDB C8色谱柱(4.6mm×250mm，
5μm)，流动相磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱见表1，检测波长254nm；流速1.2mL/min；柱温35℃；进样量10μL。
2.2 系统适用性
分离度溶液：称取孟鲁司特钠峰鉴别用对照品约10mg，精密称定，置10mL白色量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，混匀。
杂质A储备液：准确称取约10mg的杂质A对照品，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀。
杂质D储备液：准确称取约10mg 的杂质D对照品，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。
孟鲁司特钠标准储备液：准确称取约10mg孟鲁司特钠对照品，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。混匀。
标准溶液：精密量取2.0mL孟鲁司特钠标准储备液、10.0mL的杂质A储备液、 5.0mL的杂质D储备液，置100mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度。
2.3 线性关系考察
线性储备溶液-1[4-6]：分别吸取10.0mL孟鲁司特钠标准储备液、50.0mL的杂质A 储备溶液和25.0mL的杂质D储备溶液，至100mL的容量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，混匀。
线性储备溶液-2：分别吸取5.0mL的杂质A储备溶液、5.0mL的杂质D储备溶液 和5.0mL的孟鲁司特钠标准储备溶液，至20mL的量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。
按照下表用稀释剂进一步稀释线性储备溶液(1和2)，得到线性测试溶液，浓度为QL至相当于标准溶液的300%，每份线性测试溶液各进样1次。见表2。
2.4 定量限
取线性项下的最低浓度作为定量限，连续进样6针，记录峰面积。
2.5 方法精密度
取不少于20片样品，称重，磨粉，准确称取相当于25mg的孟鲁司特的粉末，置25mL的量瓶中，加入20mL的稀释剂，机械振摇20min，稀释剂稀释至刻度，混匀，用0.45μm的滤膜过滤，弃去2mL初滤液。按照测试方法制备6份孟鲁司特钠片样品溶液。
2.6 准确度
使用线性下的线性贮备液(1和2)作为准确度测试的标准贮备液。准确称取约500 mg的孟鲁司特钠片(10mg)的粉末(相当于25mg孟鲁司特)，至25mL的容量瓶中，按照表3精密移取线性储备溶液，加入适量的稀释剂，机械振摇20min，稀释剂稀释至刻度，混匀，用0.45μm的滤膜过滤，弃去2mL初滤液。分别对9份准确度测试样品溶液各进样1次。
2.7 稳定性试验
在室温下保存分离度溶液(SS溶液)、标准溶液(Std)、样品溶液，在所有溶液制备后的0、8、24、48h分别对SS溶液、对照品溶液、样品溶液进行进样。
3 实验结果
3.1 系统适用性
按上述色谱条件进样，得到，分离度溶液中，杂质B与孟鲁司特的分离度≥2.5，杂质C与孟鲁司特的分离度≥1.2，符合要求。标准溶液中，理论板数按孟鲁司特钠峰计≥4000，拖尾因子(T)≤2.0，符合要求。
3.2 线性关系考察
以峰面积(Y)对浓度(X)作线性回归。线性方程分别为：Y孟鲁司特钠=22720X-771.11(r=0.9999)，Y杂质A=23468X-1993.2(r=0.9999)，Y杂质D=27121X-1074.8(r=0.9999)。线性范围分别为孟鲁司特钠 1.014935-6.089610μg/mL，杂质A 1.028-30.84μg/mL，杂质D 1.027-15.405μg/mL。
3.3 定量限
取线性项下的最低浓度作为定量限，连续进样6针，记录峰面积，孟鲁司特钠、杂质A、杂质D的RSD分别为0.8%、0.8%、1.3%。
3.4 方法精密度
按分析方法，计算各杂质含量及总杂RSD，见表4。经计算，总杂平均值为0.797%，总杂RSD (%)为1.1%。结果表明该方法的仪器精密度较好。
3.5 准确度
样品中杂质A与杂质D回收率情况见表5。经计算，杂质A回收率平均值101.5%，RSD%为1.7%。杂质D回收率平均值97.9%，RSD%为1.1%。结果表明该方法的仪器准确度较高。
3.6 稳定性试验
经过试验，SS溶液、Std溶液、样品溶液在48?h内RSD均小于2%，说明供试品在48?h内稳定性良好，能满足测定要求。
4 讨论
目前孟鲁司特钠片降解产物的测定研究报道较少，本实验对此进行了研究，发现采用HPLC法测定孟鲁司特钠片降解产物速度快、准确可靠、专属性强，适用于孟鲁司特钠片的快速分析。孟鲁司特钠、杂质A、杂质B、杂质C 及杂质D等均在254?nm 波长有较强吸收，在检测中可选择波长为254?nm处测定，同时各杂质在1.0~15.0?μg/mL范围内线性关系均较好，可在此浓度范围内进行检测。本实验通过对药片进行系统适用性、线性、QL(定量限)、准确度、方法精密度、稳定性等项目的评估分析，其结果都能达到预期要求。采用杂质对照品法测定降解产物稳定可靠，能满足检测需求，该法可用于孟鲁司特钠片质量控制。
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参考文献
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(收稿日期:2013-12-09)